復方氨氯地平替米沙坦的體內(nèi)分析方法及其臨床前藥代動力學研究.pdf

1、氨氯地平是二氫吡啶類鈣拮抗劑（鈣離子拮抗劑或慢通道阻滯劑），直接作用于血管平滑肌，降低外周血管阻力，從而降低血壓。替米沙坦是一種口服起效的，特異性血管緊張素Ⅱ受體（AT1型）拮抗劑，能夠通過阻滯腎素.血管緊張素.醛固酮系統(tǒng)（RAAS）從而降低血壓，目前已廣泛用于高血壓病的治療。有文獻報道，替米沙坦與氨氯地平聯(lián)合用藥能有效控制患者腎性高血壓，并能明顯改善腎功能。替米沙坦聯(lián)合苯磺酸氨氯地平不僅能控制高血壓，而且能夠逆轉(zhuǎn)高血壓引起的左心室肥厚

2、，療效、安全性及耐受性均好。本文的工作旨在對其臨床前藥代動力學及合并用藥相互作用做一整體評價，以支持人體藥代動力學研究并為臨床用藥提供參考依據(jù)。
　　 一、生物樣品中氨氯地平定量分析方法的建立
　　 本文采用LC-MS/MS法測定生物樣品中氨氯地平的濃度，生物樣品以NaOH堿化后用乙酸乙酯提取其中的氨氯地平，選擇鹽酸克倫特羅作為內(nèi)標化合物。質(zhì)譜分析采用DiamonsilTM（鉆石）C185μm100×4.6mm ID（迪

3、馬公司）色譜柱，等梯度洗脫方式，流動相組成為甲醇：水=80:20（含0.05％甲酸），流速為0.8ml/min，3:2分流進樣，流入質(zhì)譜的流速為0.32ml/min，柱溫30℃，進樣量20μl，分析時間4.0 min。生物樣品中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾樣品的測定，經(jīng)方法驗證，在各自的生物樣品濃度范圍內(nèi)，均呈良好線性，線性范圍為2.03～507.5ng/ml，r>0.99；所有測定生物樣品方法的日內(nèi)RSD為2.71～4.78％，日間RSD為3.

4、71～5.99％。說明該方法的準確度、精密度、靈敏度、專屬性及定量線性等均符合生物樣品的分析要求，可以用于以氨氯地平表征的氨氯地平替米沙坦復方試驗藥物的臨床前藥代動力學研究。
　　 二、生物樣品中替米沙坦定量分析方法的建立
　　 本文采用反相高效液相色譜法測定生物樣品中替米沙坦的濃度，生物樣品經(jīng)乙腈沉淀蛋白后用直接進樣測定樣品中的替米沙坦，選擇萘普生作為內(nèi)標化合物。色譜分析采用DiamonsilTM（鉆石）C185μm1

5、50×4.6mm ID（迪馬公司）色譜柱，等梯度洗脫方式，流動相組成乙腈-40mmol/L磷酸二氫鈉溶液-磷酸=42:58:0.02（V/V/V），；流速：1.0ml/min：熒光激發(fā)波長為305nm，發(fā)射波長365nm；柱溫：35℃；進樣量20μl，分析時間11 min。生物樣品中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾樣品的測定，經(jīng)方法驗證，在各自的生物樣品濃度范圍內(nèi)，均呈良好線性，線性范圍為5.025～1005ng/ml，r>0.99；所有測定生物樣品

6、方法的日內(nèi)RSD為2.19～4.87％，日間RSD為4.25～5.64％。高濃度血漿樣品經(jīng)稀釋后不影響其實際血藥濃度，說明血漿中替米沙坦的高效液相色譜分離分析方法的準確度、精密度、靈敏度、專屬性及定量線性等均符合生物樣品的分析要求，可以用于以替米沙坦表征的氨氯地平替米沙坦復方試驗藥物的臨床前藥代動力學研究。三、Beagle犬不同比例組方單劑量口服給藥單方對照藥物及復方試驗藥物的臨床前藥代動力學研究
　　 本文采用自身對照、隨機交

7、叉試驗方法，選擇三制劑三周期的3×3拉丁方設(shè)計給藥方案，Beagle犬單劑量口服給藥苯磺酸氨氯地平對照藥物、替米沙坦對照藥物以及氨氯地平替米沙坦復方試驗藥物后，于不同時間點取血，用上述建立的方法分別測定血漿中氨氯地平及替米沙坦的濃度，根據(jù)所得的血漿藥物濃度-時間曲線，采用非房室模型分別估算以氨氯地平和替米沙坦表征的氨氯地平替米沙坦復方試驗藥物的藥代動力學參數(shù)，并采用方差分析和雙單側(cè)t檢驗進行統(tǒng)計比較分析，考察氨氯地平替米沙坦復方試驗藥物

8、中氨氯地平和替米沙坦不同比例組方合并用藥的藥代動力學相互影響。
　　 單劑量試驗結(jié)果表明：以氨氯地平表征的氨氯地平替米沙坦復方試驗藥物的相對生物利用度為82.7％～117.9％，生物利用度符合要求。進一步對lnCmax、lnAUC0～72進行雙單側(cè)t檢驗，結(jié)果顯示氨氯地平復方試驗藥物和氨氯地平對照藥物雙單側(cè)t檢驗合格，即不同比例組方下單用氨氯地平及與替米沙坦合用（氨氯地平替米沙坦復方試驗藥物）時氨氯地平的主要藥代動力學參數(shù)無明顯

9、改變，表明氨氯地平替米沙坦不同比例組方復方試驗藥物合并用藥不存在藥代動力學相互影響。
　　 以替米沙坦表征的氨氯地平替米沙坦復方試驗藥物的相對生物利用度為88.7％～120.8％，生物利用度符合要求。進一步對lnCmax、lnAUC0～72進行雙單側(cè)t檢驗，結(jié)果顯示氨氯地平替米沙坦復方試驗藥物和替米沙坦對照藥物雙單側(cè)t檢驗合格，即不同比例組方下單用替米沙坦及與氨氯地平合用（氨氯地平替米沙坦復方試驗藥物）時以替米沙坦的主要藥代動力

10、學參數(shù)無明顯改變，表明氨氯地平替米沙坦不同比例組方復方試驗藥物合并用藥不存在藥代動力學相互影響。
　　 四、Beagle犬低中高劑量口服給藥氨氯地平替米沙坦復方試驗藥物的臨床前藥代動力學研究
　　 本試驗根據(jù)藥效學研究提供的實驗數(shù)據(jù)結(jié)果，以氨氯地平：替米沙坦比例1:6為最佳組方，1:6組方給藥的臨床前藥代動力學研究中的給藥劑量作為中劑量，設(shè)計成年、健康Beagle犬靜口服給藥氨氯地平替米沙坦低、中、高三個劑量組進行藥代動

11、力學研究。將18條犬隨機分成3組，分別口服給藥氨氯地平替米沙坦復方低劑量（以氨氯地平計5.4mg，替米沙坦32.4mg），中劑量（以氨氯地平計10.8mg，替米沙坦64.8mg），高劑量（以氨氯地平計21.6mg，替米沙坦129.6mg），測定血漿中氨氯地平和替米沙坦?jié)舛取?br>　　 Beagle犬單劑量口服低中高劑量氨氯地平替米沙坦后實驗結(jié)果表明，口服低、中、高劑量劑量后的氨氯地平的Cmax和AUC0～72h分別為63.08±12

12、.37ng/ml和790.17～57.35ng·h/ml、86.83±14.40ng/ml和1675.58±287.82ng·h/ml、160.75±39.43ng/ml和3501.24±859.69ng·h/ml。
　　 替米沙坦的Cmax和AUC0～72h分別為1221.58±241.64ng/ml和6314.02±305.25ng.h/ml、1949.52±243.30ng/ml和12143.51±959.75ng·h/m

13、l、4472.15±485.71ng/ml和24315.48±2039.78ng·h/ml。
　　 五、Beagle犬多劑量口服給藥氨氯地平替米沙坦復方試驗藥物的臨床前藥代動力學研究
　　 達穩(wěn)態(tài)過程服藥每日1次，每次給藥中劑量氨氯地平替米沙坦復方（以氨氯地平計10.8mg，替米沙坦64.8mg），連續(xù)四天，即受試犬禁食過夜后，于每日口服給藥中劑量氨氯地平替米沙坦復方。第五天一次給藥中劑量氨氯地平替米沙坦復方（以氨氯地平

14、計10.8mg，替米沙坦64.8mg）后，考察穩(wěn)態(tài)藥代動力學特征。
　　 Beagle犬單劑量口服多劑量氨氯地平替米沙坦復方后氨氯地平的穩(wěn)態(tài)Cmax和AUC0～72h為101.45±24.40ng/ml和1761.26±328.86 ng·h/ml，以單劑量口服氨氯地平替米沙坦復方的藥動學參數(shù)為參比，用梯形面積法（AUC）氨氯地平替米沙坦多劑量口服達穩(wěn)態(tài)后的相對生物利用度為105.6％±13.5％。經(jīng)三因素方差分析顯示，多劑量口

15、服氨氯地平替米沙坦復方藥物和單劑量口服氨氯地平替米沙坦的各主要藥代動力學參數(shù)均無顯著性差異。即多劑量服用氨氯地平替米沙坦復方藥物，體內(nèi)氨氯地平無明顯蓄積。
　　 替米沙坦的穩(wěn)態(tài)Cmax和AUC0～72h為1975.80±73.38ng/ml和13431.64±1222.22 ng·h/ml。以單劑量口服氨氯地平替米沙坦復方的藥動學參數(shù)為參比，用梯形面積法（AUC）氨氯地平替米沙坦多劑量口服達穩(wěn)態(tài)后的相對生物利用度為110.7％±