LC-MS-MS法研究美羅培南在CRRT患者與非CRRT患者的藥代動(dòng)力學(xué).pdf

1、美羅培南是第二代碳青霉烯類抗生素，抗菌譜廣，對革蘭陽性菌、陰性菌均具有很強(qiáng)的抗菌作用，主要經(jīng)腎臟排泄，常用于治療肺炎、婦科感染、尿路感染、腦膜炎、敗血癥等嚴(yán)重感染。對于嚴(yán)重感染或膿毒癥的患者，急性腎損傷(AKI)發(fā)生率較高，針對AKI的治療中，具備良好的生物相容性、對液體清除緩慢而持續(xù)等特點(diǎn)的連續(xù)腎臟替代治療(CRRT)，成為了最優(yōu)先考慮的治療方式。由于CRRT會(huì)顯著影響大多數(shù)藥物在機(jī)體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)特征，因此研究CRRT時(shí)美羅培南

2、的藥物代謝動(dòng)力學(xué)具有重要的臨床意義。
　　目的：
　　1.建立人血漿中美羅培南的LC-MS/MS測定方法；
　　2.探討美羅培南給藥劑量相同時(shí)，不同的CRRT治療劑量對美羅培南藥代動(dòng)力學(xué)影響；
　　3.探討肌酐清除率小于50ml/min時(shí)，美羅培南在CRRT患者與非CRRT患者中的藥代動(dòng)力學(xué)差異；
　　4.探討腎功能對美羅培南在非CRRT患者中的藥代動(dòng)力學(xué)影響。
　　方法：
　　1.LC-MS/

3、MS法測定人血漿中美羅培南濃度
　　1.1.色譜條件
　　色譜柱：Kinetex HILIC colum(100×2.1 mm,2.6um)（Phenomenex, USA)；流動(dòng)相：A：0.2％甲酸，8mM醋酸銨水溶液 B：乙腈；流速：0.4ml/min；進(jìn)樣量：5μl；柱溫：40℃；梯度洗脫。
　　1.2.質(zhì)譜條件
　　采用電噴霧離子源，正離子模式，多離子反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。
　　質(zhì)譜參數(shù)：IS：550

4、0V；離子源溫度：500℃；GS1：50 psi； GS2：50 psi；CUR：25psi；
　　美羅培南：m/z384.2→m/z141.1，DP：65V，CE：25 V；
　　哌唑嗪：m/z384.1→m/z247.0，DP：100V，CE：45 V。
　　1.3.血漿樣品預(yù)處理
　　精密量取血漿100μl于空白離心管中，加入10μl哌唑嗪內(nèi)標(biāo)溶液，再加入沉淀劑乙腈800μl，渦旋3min，離心（15000

5、g，10min），取上清液500μl，離心（15000g，3min），留取上清液進(jìn)樣測定。
　　2.美羅培南在CRRT患者與非CRRT患者中藥代動(dòng)力學(xué)研究
　　2.1.納入患者及美羅培南用藥
　　納入患者為2016年收治于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院 ICU病房應(yīng)用美羅培南的患者，16例CRRT患者，美羅培南給藥劑量為1g，q12h；20例非CRRT患者，美羅培南給藥劑量為1g，q8h和1g，q12h。
　　2.2.標(biāo)本

6、采集與保存
　　2.2.1.CRRT患者標(biāo)本采集與保存
　　CRRT患者非首劑給藥后的0 h、0.5 h，1h、1.5 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h采集濾器前血標(biāo)本2ml，離心后用凍存管保存，儲(chǔ)存于-70℃冰箱。
　　2.2.2.非CRRT患者標(biāo)本采集與保存
　　非CRRT患者體內(nèi)藥物達(dá)穩(wěn)態(tài)后，于給藥后0h、1 h、2 h、4 h和6 h采集血標(biāo)本2ml，離心后用凍存管保存，儲(chǔ)存于-70

7、℃冰箱。
　　2.3.數(shù)據(jù)處理
　　采用WinNonlin6.4和SPSS21.0對美羅培南血漿藥物濃度（CRRT患者采集的濾器前藥物濃度根據(jù)換算系數(shù)得血漿藥物濃度）進(jìn)行處理， WinNonlin6.4采用非房室模型，計(jì)算方法選擇線性梯形線性內(nèi)插法(LTLI)；SPSS21.0處理數(shù)據(jù)時(shí)，數(shù)據(jù)采用Mean±SD表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)后用單因素方差分析，組間兩兩比較采用Dunnett-t檢驗(yàn)。

8、r>　　結(jié)果：
　　1.LC-MS/MS法測定人血漿中美羅培南濃度
　　血漿中美羅培南及內(nèi)標(biāo)哌唑嗪在該方法中專屬性良好，血漿中內(nèi)源性物質(zhì)對美羅培南濃度測定無干擾；美羅培南在0.5μg/ml-50μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低檢測限為0.5μg/ml；低(1μg/ml)、中(8μg/ml)、高(40μg/m)三種濃度提取回收率均在99%-106%之間，日內(nèi)，日間RSD%均小于8%，最低定量限RSD%小于20%，美羅培南的凍

9、融穩(wěn)定性及儲(chǔ)藏于-70℃條件下60天穩(wěn)定性、自動(dòng)進(jìn)樣器放置12h及在室溫、4℃條件下放置4h的穩(wěn)定性，基質(zhì)效應(yīng)及血漿稀釋10倍穩(wěn)定性均符合生物樣品定量分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則。
　　2.美羅培南在CRRT患者與非CRRT患者中藥代動(dòng)力學(xué)研究
　　2.1.美羅培南在給藥劑量為1g，q12h，不同CRRT治療劑量時(shí)的藥代動(dòng)力學(xué)
　　美羅培南給藥劑量為1g， q12h， CRRT治療劑量為25mL/kg/h和35mL/kg/h的

10、t分別為（3.31±0.63）h、（2.63±0.38）h，Vd分別為（23.17±6.16） L、（16.82±3.68）L，以上兩參數(shù)兩組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其他參數(shù)如Cmax、AUC和CL兩組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.2.肌酐清除率小于50ml/min時(shí)，美羅培南在CRRT患者與非CRRT患者體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)
　　CRRT治療劑量為25mL/kg/h患者與非CRRT患者的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行比較，Cmax降低、AUC

11、減少、Vd減少、CL增加，且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；CRRT治療劑量為35mL/kg/h患者與非CRRT患者進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)比較，t縮短、AUC減少、Vd降低、CL增加，且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.3.美羅培南在不同腎功能狀態(tài)的非CRRT患者的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)
　　患者按照慢性腎臟疾病分期進(jìn)行分組，肌酐清除率在60-90ml/min和50-60ml/min范圍內(nèi)的非CRRT患者分別與肌酐清除率＞90ml/min的非CRRT患者相比較

12、，t均延長，AUC均增大，Vd均增大，CL均減少，以上參數(shù)比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:
　　1.本研究建立了LC-MS/MS法測定人血漿中美羅培南藥物濃度，該方法準(zhǔn)確、簡便、專屬性好，可用于美羅培南的藥代動(dòng)力學(xué)研究。
　　2.美羅培南給藥劑量為1g，q12h，CRRT治療劑量為35mL/kg/h時(shí)，患者體內(nèi)美羅培南t縮短、Vd降低，且與CRRT治療劑量為25mL/kg/h組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；AUC

13、、CL均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；提示CRRT治療劑量為35mL/kg/h時(shí)，加快了美羅培南的代謝。
　　3.肌酐清除率小于50ml/min，美羅培南給藥劑量為1g，q12h時(shí)，與非CRRT患者比較，CRRT對美羅培南藥代動(dòng)力學(xué)有顯著影響，CRRT作為血液凈化的一種方式，使得美羅培南體內(nèi)代謝加快，增加了藥物清除。
　　4.美羅培南用藥劑量為1g，q8h時(shí)，腎功能不全患者對美羅培南的代謝減慢，清除率明顯降低，用藥時(shí)應(yīng)根據(jù)患者腎功能調(diào)整美羅