肝星狀細胞中Hic--5對肝細胞性肝癌生物學行為影響的研究.pdf

1、目的：從組織學層面和細胞學層面研究肝星狀細胞中Hic-5對肝細胞性肝癌生物學行為的影響，探討HCC的新的治療靶點，為HCC的治療提供理論依據(jù)。
　　方法：收集2015年7月-2015年10月于我院診斷為HCC或肝臟外傷，并經(jīng)手術(shù)切除的肝臟組織。對于這部分病人的肝臟組織：1、采用蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot，WB)的方法按以下分組：癌組織、近癌旁肝組織（距離癌組織＜1.0cm），遠癌旁肝組織（距離癌組織＞1.0cm）;高

2、分化、中分化、低分化HCC患者的癌組織;HCC合并乙肝肝硬化、HCC無乙肝肝硬化患者的癌組織，檢測肝組織中Hic-5表達程度。2、采用免疫組化的方法檢測高、中、低分化HCC患者的癌組織、正常肝組織（肝臟外傷患者）中Hic-5的表達情況。3、隨機選取16例HCC患者，采用免疫組化檢測肝癌組織中Hic-5的表達，選取光密值的中位數(shù)作為Hic-5表達的臨界值，區(qū)分其表達的高低程度，采用乘積極限法分析Hic-5高低與術(shù)后生存時間的關(guān)系。4、應(yīng)用

3、SiRNA的方法沉默人肝星狀細胞株（LX-2）中Hic-5基因，采用Western bolt的方法檢測Hic-5的沉默情況。5、將人肝星狀細胞株(LX-2)與人肝癌細胞系(Hep G2)分三組共培養(yǎng)：A組（正常對照組）：正常LX-2細胞株與Hep G2細胞系共培養(yǎng)組，B組（空白對照組）：SiRNA-NC轉(zhuǎn)染的LX-2細胞株與Hep G2細胞系共培養(yǎng)組，C組（實驗組）：SiRNA-Hic-5轉(zhuǎn)染的LX-2細胞株與Hep G2細胞系共培養(yǎng)組

4、，培養(yǎng)0、24、48、72小時收集細胞或細胞培養(yǎng)液，通過Western bolt的方法檢測各個時間點Hic-5、Collagen1a1、Collagen3a1蛋白的表達情況;通過逆轉(zhuǎn)錄PCR的方法檢測Collagen1a1、Collagen3a1mRNA的表達情況;6、按A、B、C分組建立共培養(yǎng)體系，共培養(yǎng)24小時后獲取條件養(yǎng)基進行細胞劃痕實驗檢測肝癌細胞侵襲能力的變化。
　　結(jié)果：1、Western bolt結(jié)果顯示：在癌組織、

5、近癌旁肝組織、遠癌旁肝組織中Hic-5高表達于癌織組(P＜0.05);在高、中、低分化HCC癌組織中Hic-5高表達于低分化組(P＜0.05);HCC合并乙肝肝硬化、HCC無乙肝肝硬化的癌組織中Hic-5高表達于HCC合并乙肝肝硬化組(P＜0.05)。2、免疫組化結(jié)果顯示：在高、中、低分化HCC患者的癌組織、正常肝組織中Hic-5高表達于低分化組(P＜0.05);3、Hic-5低表達組術(shù)后生存時間明顯長于高表達組(P＜0.05)。4、S

6、iRNA-Hic-5轉(zhuǎn)染的人星狀細胞(LX-2)細胞株中Hic-5的表達明顯低于對照組，其差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。4、在人星狀細胞與肝癌細胞共培養(yǎng)時A組、B組、C組Hic-5、Collagen1a1、Collagen3a1隨著培養(yǎng)時間的延長表達程度遞增，在設(shè)定的相同時間點（0h，24h，48h和72h），C組Hic-5、Collagen1a1、Collagen3a1蛋白表達較B組明顯降低(P＜0.05)，而B組與A組的差異無

7、統(tǒng)計學意義(P＞0.05);5、細胞劃痕實驗：C組肝癌細胞遷移的距離相對于A、B兩組明顯減少(P＜0.05)，A、B組之間無明顯差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論：1、Hic-5表達程度取決于距癌組織的距離及其分化程度，隨著與癌組織距離及分化程度的增加，Hic-5表達逐步降低;2、Hic-5表達程度的高低與術(shù)后生存時間密切相關(guān)，其高表達提示預后不良;3、肝癌細胞(Hep G2)能促進肝星狀細胞（LX-2）中Hic-5的表達上調(diào)，通過