EGCG在草魚體內(nèi)的代謝及其對致病菌抑菌功效.pdf

1、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）是從茶葉中分離得到的兒茶素類單體，是茶多酚生物活性的主要成份。本實驗以草魚為實驗對象，探索以濃度為75mg/kg的EGCG灌胃草魚后，在不同時間點分析魚血漿及組織樣品中兒茶素的代謝規(guī)律。此外，我們還比較了四種兒茶素：表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）、表沒食子兒茶素（EGC）、表兒茶素（EC）體外抑制草魚致病菌嗜水氣單胞菌、銅綠假單胞菌和檸檬酸桿菌的功效研究。結(jié)論如下：

2、
　?。?）建立了草魚血漿和組織樣品的前處理方法。分別準(zhǔn)確吸取0.6mL血漿、2mL肝勻漿液于10mL具塞離心管中,均加入為40μL的20％的 Vc以及200μL的0.05%Na2-EDTA溶液，混勻后,再準(zhǔn)確加入乙酸乙酯4mL,振蕩5min,6000r/min高速離心5min,取出全部上層有機(jī)相;再加入2mL乙酸乙酯重復(fù)萃取一次,合并兩次萃取的有機(jī)相于尖底玻璃離心管中,45℃水浴中弱氮氣流吹干,向血漿樣品中加入500uL10%的

3、乙腈-水溶液,振蕩溶解,18000r/min高速離心5min后,吸取上清液20μL進(jìn)樣分析。肝臟組織萃取液揮干后用500uL的10%乙腈-水溶解,然后再加入0.5mL正己烷去脂,振蕩后,18000r/min高速離心5min后,棄去全部正己烷層,0.5mL正己烷重復(fù)去脂一次,高速離心后取下層20μL進(jìn)樣分析。
　?。?）運用HPLC檢測分析血液、肝臟中的EGCG的含量，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行含量測定，作出EGCG在血清、肝臟中吸收代謝的濃

4、度-時間曲線圖。灌胃之后，分別于15min、30min、45min、60min、120min和300min六個時間點收集魚血液樣品。經(jīng)與EGCG標(biāo)品、空白樣品對照，灌胃后15-300min血清中均能檢測到EGCG原型，且15-45min時間范圍內(nèi)，隨著時間推移，血漿中EGCG的濃度不斷上升，45min時達(dá)到最大濃度。達(dá)峰時間Tmax為45min，最大濃度Cmax為512.8068ug/mL，在此濃度下，計算得到的相對生物利用度為5.57

5、%，60-300min隨之緩慢下降。
　?。?）同樣，15-300min時間范圍內(nèi)的肝臟樣品中也均能檢測到EGCG原型，在15-60min時間范圍內(nèi)，隨著時間推移，EGCG濃度不斷增加，灌胃后60minEGCG達(dá)到最大濃度Cmax434.1476ug/mL，達(dá)峰時間Tmax為60min。
　?。?）運用UPLC-ESI-Orbitrap-MS/MS對樣品組織進(jìn)行分析檢測，結(jié)果表明，15-300min時間范圍內(nèi)在血清、肝臟和腸

6、道組織樣品中均能檢測到EGCG原型，在時間點為30min的肝臟樣品中檢測到ECG的存在，60-300min時間范圍在血清、肝臟和腸道組織樣品中均檢測到EGCG代謝產(chǎn)物ECG的存在。
　?。?）通過一系列遞增濃度的兒茶素溶液對四種菌液的抑菌試驗研究可知，四種兒茶素對四種菌大腸桿菌44102、檸檬酸桿菌、銅綠假單胞菌和嗜水氣單胞菌均有不同程度的抑菌效果，低濃度的藥液（0.05-0.4mM）的抑制作用屬于低敏；中濃度的藥液（0.4-2.

7、0mM）的抑制作用屬于中敏；高濃度的藥液（2.0-10mM）的抑制作用屬于高敏。0.05mM為MIC（最低抑菌濃度），當(dāng)藥液濃度由0.2mM增加到4.0mM時，抑菌圈的增幅較大，抑菌效果增強(qiáng)的幅度較為明顯；當(dāng)藥液濃度由4.0mM增加到10.0mM時，抑菌圈增幅較小，抑菌效果增強(qiáng)的幅度較小，抑菌效果逐漸達(dá)到上限?？傮w來看，隨著藥液濃度的增加，抑菌圈直徑呈增長趨勢，即抑菌強(qiáng)度隨藥液濃度增加而增加。同一濃度的藥液對不同菌的抑制作用不同。EGC