黃連素的提純及其對(duì)三種水產(chǎn)動(dòng)物類致病菌的抑菌特性研究.pdf

1、副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）以及嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)常見的病原菌，近年來由其引發(fā)的細(xì)菌性疾病不僅給養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，還威脅著人類的健康。本實(shí)驗(yàn)以黃連為材料，研究黃連素的最佳提純工藝以及其對(duì)三種病原菌的抑菌作用，同時(shí)探討黃連素的抑菌機(jī)制，為黃連素在細(xì)菌性疾病防治中的應(yīng)用提供依據(jù)，也利于進(jìn)一步深究黃

2、連素的抑菌機(jī)理。
　　利用傳統(tǒng)回流、微波、超聲等6種方法提取黃連素，并用沉淀法與大孔樹脂法純化，TLC、HPLC測定，結(jié)果表明80％乙醇，料液比1：20，T=90℃，t=90min回流提取2次黃連素得率為8.3%，經(jīng)大孔樹脂-沉淀法純化、HPLC測定，黃連素純度為86.25%。
　　測定黃連素對(duì)三種供試菌MIC、MBC，并運(yùn)用電鏡掃描黃連素對(duì)供試菌的作用情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，黃連素對(duì)三種副溶血弧菌、溶藻弧菌有著強(qiáng)烈的抑制效果，其M

3、IC(Minimal inhibitory Concentration)、MBC(Minimal Bactericidal Concentration)值分別為：0.391g/L、0.391g/L；0.391g/L、0.781g/L；對(duì)嗜水氣單胞菌的抑制作用相對(duì)較弱，MIC、MBC分別為：0.781g/L、1.563g/L。電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，黃連素作用下的供試菌菌體黏連、破碎、內(nèi)容物流出等，明顯非正常死亡，且黃連素對(duì)菌體的破壞程度隨著黃連素

4、濃度增加而增加。
　　抑菌圈法測定黃連素對(duì)革蘭氏陽性菌與陰性菌的作用差異，氧電極法測定不同濃度黃連素對(duì)三種供試菌的呼吸作用影響，并據(jù)吸光值繪制黃連素作用下供試菌一步生長曲線，SDS-PAGE觀察黃連素對(duì)供試菌蛋白表達(dá)的影響，以黃連素代替EB核酸進(jìn)行核酸電泳。結(jié)果表明，黃連素作用下：
　?、俑锾m氏陽性菌與陰性菌的抑菌圈無明顯差異；
　?、谌N供試菌單位時(shí)間內(nèi)耗氧量微有降低但無明顯規(guī)律；
　?、酃┰嚲鷿摲谘娱L2h至

5、4h不等，但延長后部分菌體仍存在對(duì)數(shù)期；
　?、艿鞍诐舛冉档?，且電泳顯示部分條帶未表達(dá)；
　?、蔹S連素可以像EB一樣插入到DNA中。
　　綜上，本文對(duì)黃連素的提取及其對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物類致病菌的作用進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，不僅獲得了黃連素的最佳提取工藝，還發(fā)現(xiàn)其對(duì)副溶血弧菌、溶藻弧菌以及氣單胞菌有著良好的抑菌效果，可以應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)細(xì)菌性疾病的防治中，抑菌機(jī)制方面，黃連素在細(xì)菌潛伏期與活躍的DNA發(fā)生結(jié)合形成了某種復(fù)合物，從而