ELF5調(diào)控乳腺腫瘤細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移的分子機(jī)理.pdf

1、乳腺癌是威脅女性生命健康的惡性疾病之一。伴隨著影像學(xué)診斷技術(shù)的進(jìn)步以及治療手段的提高，乳腺癌患者的預(yù)后獲得顯著的提高，但腫瘤轉(zhuǎn)移依舊是乳腺癌患者致死的主要原因，更是目前乳腺癌治療中亟待攻克的難題之一，因此，乳腺腫瘤轉(zhuǎn)移分子機(jī)制的研究尤為重要。
　　轉(zhuǎn)錄因子ELF5（E74-like factor5，ESE-2）是ETS（E-twenty-six，ETS）家族成員之一，它在乳腺發(fā)育以及乳腺腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。ELF5通

2、過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)不同信號通路來影響細(xì)胞的增殖、生長及分化等過程。在乳腺癌中，ELF5是誘導(dǎo)乳腺腫瘤細(xì)胞由表達(dá)雌激素受體（estrogen receptor，ER）陽性的luminal亞型向表達(dá)ER陰性的 basal亞型轉(zhuǎn)化的一個(gè)關(guān)鍵調(diào)控因子，并抑制細(xì)胞獲得雌激素敏感表型。另外，ELF5與癌癥的發(fā)生和發(fā)展也密切相關(guān)，我們通過基因表達(dá)定量分析，發(fā)現(xiàn)ELF5能夠顯著抑制 STAT3 mRNA表達(dá)水平，但二者之間的作用關(guān)系及其在乳腺腫瘤細(xì)胞中所扮演

3、的角色尚未確定。因此，本文以ELF5通過STAT3信號通路對乳腺腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制進(jìn)行研究。
　　首先，探究ELF5在乳腺腫瘤細(xì)胞系中的作用。通過MTT、細(xì)胞劃痕、小室侵襲、細(xì)胞凋亡等實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了ELF5對乳腺癌細(xì)胞功能的影響。研究發(fā)現(xiàn)，在MCF-7細(xì)胞中過表達(dá)ELF5后，細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲的能力明顯降低；在T47D細(xì)胞中使用RNA干擾技術(shù)降低ELF5的表達(dá)后，細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲的能力顯著性提高。另外，在MCF-7細(xì)胞

4、中過表達(dá)ELF5后，早期細(xì)胞凋亡數(shù)由2.6%增加到21%，晚期細(xì)胞凋亡數(shù)由12.2%增加到22.6%。
　　其次，探究ELF5與乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)信號通路關(guān)鍵因子的關(guān)系。通過實(shí)時(shí)定量PCR、Western blot等方法檢測了 ELF5對乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的關(guān)鍵因子以及相關(guān)靶基因表達(dá)的影響。檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)ELF5能夠明顯減弱STAT3 mRNA和蛋白表達(dá)水平，然而并不能影響MMP2、CTNB1、CYP1a1的mRNA水平。
　　再次，

5、探究ELF5對腫瘤細(xì)胞遷移標(biāo)志分子CD24的調(diào)控作用。采用熒光素報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)和ChIP實(shí)驗(yàn)探究ELF5與CD24之間的調(diào)控關(guān)系，發(fā)現(xiàn)ELF5可靶向結(jié)合到CD24的啟動(dòng)子區(qū)域，并且呈劑量依賴性激活CD24的轉(zhuǎn)錄。
　　最后，探究ELF5、CD24和STAT3三者之間的聯(lián)系。通過RNA干擾技術(shù)降低CD24表達(dá)后，發(fā)現(xiàn)ELF5對STAT3的抑制作用顯著減弱，推測ELF5對STAT3轉(zhuǎn)錄水平的抑制作用是通過CD24實(shí)現(xiàn)的。ELF5抑制ST

6、AT3/JAK/TAT信號通路，進(jìn)而抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。
　　以上結(jié)果表明：轉(zhuǎn)錄因子ELF5作為乳腺腫瘤的抑制因子能夠顯著抑制乳腺腫瘤細(xì)胞MCF-7的增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲能力，并且可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡。ELF5可靶向結(jié)合到CD24的啟動(dòng)子區(qū)域，并且呈劑量依賴性激活CD24的轉(zhuǎn)錄，ELF5通過調(diào)控CD24的表達(dá)水平間接抑制STAT3表達(dá)，抑制STAT3/JAK/TAT信號通路。該研究有助于了解乳腺腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，為乳腺癌