腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因子CD82對(duì)人滋養(yǎng)層細(xì)胞分化的調(diào)控及其分子機(jī)理研究.pdf

1、背景：胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞在哺乳動(dòng)物胚胎植入和胎盤發(fā)生過程中具有十分重要的作用。在人類早期妊娠進(jìn)程中，滋養(yǎng)層細(xì)胞對(duì)母體子宮壁的適度侵潤是胎盤形成的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的分化受到多種分子如生長因子、細(xì)胞因子和激素的調(diào)控，其調(diào)控異常會(huì)導(dǎo)致多種妊娠相關(guān)疾病的發(fā)生，如自發(fā)流產(chǎn)、絨毛膜癌、子癇前期和胎兒生長受限等。腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因子CD82在抑制腫瘤細(xì)胞的侵潤遷移上起著重要的作用。而且，滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵入特性與腫瘤細(xì)胞的侵襲特性十分相似。我們實(shí)驗(yàn)室前期

2、的研究表明腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因CD82在妊娠前期小鼠子宮中呈現(xiàn)規(guī)律表達(dá)。但是，CD82基因在人胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞分化中的功能和相關(guān)分子機(jī)理尚不明確。
　　目的：研究腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因子CD82在調(diào)控人滋養(yǎng)層細(xì)胞細(xì)胞侵潤遷移中的作用以及發(fā)揮作用的相關(guān)分子機(jī)制。
　　方法：1.免疫組化技術(shù)檢測(cè)CD82在人妊娠不同時(shí)期滋養(yǎng)層細(xì)胞中的表達(dá)位置。2.采用基因工程技術(shù)，構(gòu)建含CD82全長基因的Flag-CMV4質(zhì)粒，用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染，過表達(dá)CD82基因

3、。3.篩選具有CD82干擾效率的siRNA片段，用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染，干擾CD82表達(dá)。4.利用早期絨毛外植體培養(yǎng)的方法研究CD82對(duì)絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞遷移的影響。5.運(yùn)用Matrigel細(xì)胞侵潤模型和Transwell細(xì)胞遷移模型檢測(cè)過表達(dá)和干擾CD82對(duì)HTR8/SVneo細(xì)胞侵潤和遷移能力的影響。6.收集細(xì)胞轉(zhuǎn)染上清，明膠酶譜檢測(cè)MMPs的表達(dá)，蛋白免疫印跡檢測(cè)MMPs的組織抑制因子TIMP-1和-2的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.CD82在

4、人妊娠早期胎盤絨毛主要定位于細(xì)胞滋養(yǎng)層柱(TC)和合體滋養(yǎng)層，足月侵潤到母體蛻膜組織的絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞中也有CD82的表達(dá)。在正常的滋養(yǎng)層細(xì)胞系中CD82高表達(dá)。2.CD82全長質(zhì)?？梢赃^表達(dá)CD82；siRNA片段可以降調(diào)CD82的表達(dá)。3。CD82 siRNA促進(jìn)早期絨毛外植體絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞的遷移。4。Matrigel細(xì)胞侵潤模型和Transwell細(xì)胞遷移模型顯示CD82 siRNA顯著促進(jìn)HTR8/SVneo細(xì)胞(侵潤型絨毛外