極端溫度條件對大鼠調節(jié)性T細胞影響的研究.pdf

1、目的：探討環(huán)境溫度發(fā)生驟然變化時大鼠CD4+、CD4+CD25+、CD4+CD25+Foxp3+淋巴細胞數(shù)量的變化規(guī)律，為突然氣溫變化所長生的感染性及免疫性相關疾病的防治提供新的思路和實驗依據(jù)。
　　 方法：①將252只9-15周齡雄性SD大鼠，體重198-378克(275.24g±35.73g)應用人工氣候培養(yǎng)箱制作驟降溫寒冷和驟升溫極熱大鼠模型；②大鼠隨機分為正常溫度(20℃)、驟降溫(4℃)和驟降溫(-12℃)、驟升溫(3

2、7℃)等四組，每個溫度組又設立對照組、Con-A組、LPS組等三個亞組，每個亞組觀察1h、4h、8h、12h、24h、48h和168h七個時間點，每個時間點3只SD大鼠；③觀察結束后給大鼠腹腔注射水合氯醛全身麻醉，頸動脈取血，經(jīng)EDTA抗凝，離心取血漿；④PE-CD25+PE-Cy5-CD4+FITC-Foxp3抗大鼠單克隆抗體免疫細胞化學染色標記T淋巴細胞表面CD4、CD25，以及T淋巴細胞胞漿Foxp3抗原分子；⑤流式細胞儀檢測大于

3、30000細胞，計數(shù)CD4+、CD4+CD25+、CD4+CD25+Foxp3+細胞陽性率；⑥統(tǒng)計學處理：使用SPSS17統(tǒng)計軟件進行，實驗結果以均數(shù)±標準差(()±SD)表示，統(tǒng)計結果使用ANOVA法進行方差分析，LSD法進行t-檢驗。
　　 結果：⑴CD4+在非刺激條件下不同時間、不同溫度表達變化差異很大，其中在8h、12h、48h、168h不同溫度組之間存在顯著差異(P<0.05)，而20℃、-12℃、37℃時，不同時間組

4、之間也存在顯著差異(P<0.05)。在37℃、4℃、-12℃時，4h、48h組低于正常對照組，以前者為甚。⑵CD4+在LPS刺激條件下不同時間、不同溫度表達變化差異較大，其中在8h、168h不同溫度組之間存在顯著差異(P<0.05)，而4℃、-12℃、37℃時，不同時間組之間也存在顯著差異(P<0.05)。在-12℃時，1h、168h高于正常對照組，37℃時，4h、48h低于正常對照組。⑶CD4+在Con-A刺激條件下不同時間、不同溫度

5、表達變化差異較大，其中在24h不同溫度組之間存在顯著差異(P<0.05)，而20℃、-12℃時，不同時間組之間也存在顯著差異(P<0.05)。在4℃、-12℃時，4h、168h組高于正常對照組。⑷20℃時，8h、24h、48h時間點，Con-A和LPS刺激組低于正常對照組(P<0.05)，1h、12h、168h時間點，Con-A和LPS刺激組高于正常對照組，并以Con-A刺激組較為顯著。⑸4℃時，1h、4h、8h、168h時間點，Con

6、-A和LPS刺激組高于正常對照組，而12h、24h、48h時間點，Con-A和LPS刺激組低于正常對照組。⑹-12℃時，除48h時間點外，Con-A組均低于正常對照組，而4h、24h、168h時間點，LPS刺激組低于正常對照組。⑺37℃時，1h、48h時間點，LPS刺激組低于正常對照組。⑻CD4+CD25+在非刺激條件下不同時間、不同溫度表達變化差異很大，其中1h、12h、168h組不同溫度組之間存在顯著差異(P<0.05)，而-12℃

7、、37℃組，不同時間組之間也存在顯著差異(P<0.05)。4℃時，1h、12h、24h、48h組低于正常對照組，-12℃時，12h、168h組低于正常對照組，37℃時，1h、48h組低于正常對照組，以后者較為顯著。⑼CD4+CD25+在LPS刺激條件下不同時間、不同溫度表達變化差異很大，其中1h、4h、8h、168h組不同溫度組之間存在顯著差異(P<0.05)，而-12℃、37℃組，不同時間組之間也存在顯著差異(P<0.05)。4℃時，

8、4h、12h、24h、48h組低于正常對照組，-12℃時，12h、168h低于正常對照組，37℃時，1h、48h組低于正常對照組，以后者較為顯著。⑽CD4+CD25+在Con-A刺激條件下不同時間、不同溫度表達變化差異很大，其中1h、8h、24h、168h不同溫度組之間存在顯著差異(P<0.05)，而37℃、-12℃組，不同時間組之間也存在顯著差異(P<0.05)。-12℃時，12h、48h、168h組低于正常對照組，37℃時，1h、4

9、8h組低于正常對照組。⑾20℃時，1h、24h時間點，Con-A刺激組低于正常對照組，1h、12、168h時間點，LPS刺激組低于正常對照組，并以Con-A刺激組較為顯著。⑿4℃時，8h、168h時間點，正常對照組與Con-A和LPS刺激組之間有差異(P<0.05)，但4h、8h、24h時間點Con-A刺激組低于正常對照組。⒀-12℃時，4h、12h時間點，正常對照組與Con-A和LPS刺激組之間有差異(P<0.05)，但12h、24h

10、時間點Con-A和LPS刺激組均顯著低于正常對照組。⒁37℃時，LPS刺激組48h、168h高于正常對照組。⒂CD4+CD25+Foxp3+在非刺激條件下不同時間、不同溫度表達變化差異很大，其中4h、12h、24h、168h不同溫度組之間存在顯著差異(P<0.05)，而-12℃、37℃，不同時間組之間也存在顯著差異(P<0.05)。4℃時，1h、12h組高于正常對照組，4h、8h、24h、48h、168h低于正常對照組；-12℃時1h、

11、168h低于正常對照組；37℃時，4h、8h、48h、168h低于正常對照組，1h、12h、24h高于正常對照組；-12℃降低較為顯著。⒃CD4+CD25+Foxp3+在LPS刺激條件下不同時間、不同溫度表達變化差異較大，其中168h，不同溫度組之間存在顯著差異(P<0.05)，而20℃、-12℃、37℃，不同時間組之間也存在顯著差異(P<0.05)。在4℃時，1h、168h組低于正常對照組；-12℃時，4h、24h組高于正常對照組，在

12、1h、8h、12h、48h、168h組低于正常對照組；37℃時，4h、12h、24h組高于正常對照組，1h、8h、48h、168h組低于正常對照組。⒄CD4+CD25+Foxp3+在Con-A刺激條件下不同時間、不同溫度表達變化差異較大，其中8h、12h，不同溫度組之間存在顯著差異(P<0.05)，而-12℃、37℃時，不同時間組之間也存在顯著差異(P<0.05)。在4℃時，1h、168h組低于正常對照組；-12℃時，1h、168h組低

13、于正常對照組；37℃時，12h組高于正常對照組，1h、4h、8h、48h、168h組低于正常對照組。⒅20℃時，12h、24h時間點，正常對照組與Con-A和LPS刺激組之間有差異(P<0.05)，8h、12h、24h、48h時間點，Con-A刺激組明顯高于正常對照組；⒅4℃時，4h、8h時間點正常對照組與Con-A和LPS刺激組之間有差異(P<0.05)，24h、48h時間點，Con-A刺激組明顯高于正常對照組；而24h、48h、16

14、8h時間點，LPS刺激組高于正常對照組。⒆-12℃時，1h、48h時間點，正常對照組與Con-A和LPS刺激組之間有差異(P<0.05)，但1h、48h時間點，Con-A刺激組均較正常對照組高，24h、48h時間點，LPS刺激組均明顯低于正常對照組。⒇37℃時，4h、12h、168h時間點，正常對照組與Con-A和LPS刺激組之間有差異(P<0.05)，而4h、48h時間點，Con-A刺激組在明顯高于正常對照組。
　　 結論：①

15、非刺激條件下，在168小時中，極端溫度(-12℃、37℃)均上調了CD4+輔助性T細胞，極端溫度(-12℃、37℃)均下調了CD4+CD25+Foxp3+調節(jié)性T細胞。②極端溫度(-12℃、37℃)條件下，Con-A刺激抑制了CD4+輔助性T的表達。③極端溫度(-12℃、37℃)條件下，LPS刺激抑制了CD4+CD25+Foxp3+調節(jié)性T細胞的表達，但是Con-A刺激在極冷溫度組中是加強了CD4+CD25+Foxp3+調節(jié)性T細胞的表