孟魯司特對(duì)支氣管哮喘大鼠輔助性T細(xì)胞17-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞平衡的影響及意義.pdf

1、背景：
　　近年研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)典的輔助性T細(xì)胞1(T helper cell1，Th1)/輔助性T細(xì)胞2(T helper cell2，Th2)失衡學(xué)說并非哮喘發(fā)病機(jī)制的全部，新興的輔助性T細(xì)胞17(T helper cell17，Th17)/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(T regulatory cell，Treg)失衡學(xué)說可能是該機(jī)制的重要補(bǔ)充。結(jié)合后者與哮喘發(fā)病的關(guān)系，探究某些常用藥物對(duì)此平衡的影響可能為治療哮喘提供新的思路。孟魯司特作為抗過

2、敏平喘藥長(zhǎng)期應(yīng)用于哮喘的臨床治療，具有一定的抗炎及抑制氣道重塑的效應(yīng)，但其具體機(jī)制仍有待探討。
　　目的：
　　觀察支氣管哮喘大鼠Th17/Treg平衡的變化，探討孟魯司特對(duì)Th17/Treg平衡的干預(yù)效應(yīng)及意義，為其應(yīng)用于臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　40只6-8周齡健康雄性Sprauge-Dawley(SD)大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組(C組)、哮喘模型組（A組）、孟魯司特組（M組）及地塞米松組（D組），每組

3、10只。A組、D組及M組于第1天腹腔注射雞卵清蛋白(ovalbumin，OVA)和Al(OH)3混合液致敏，第8天重復(fù)致敏1次，自第15天開始給予OVA生理鹽水溶液霧化激發(fā)，每日1次，每次30 min，持續(xù)8周，建立哮喘大鼠模型;M組及D組在每次激發(fā)前分別給予孟魯司特鈉灌胃、地塞米松腹腔注射;C組腹腔注射及霧化吸入均使用Al(OH)3生理鹽水混懸液替代。8周后收集支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavagefluid，

4、BALF)進(jìn)行細(xì)胞分類計(jì)數(shù);流式細(xì)胞儀(flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)血液中Th17細(xì)胞及Treg.細(xì)胞占CD4+細(xì)胞百分率;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)血漿中白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-17及IL-10濃度;蘇木精-伊紅(hematoxylin and eosin，HE)染色評(píng)價(jià)肺組織病理學(xué)改變并計(jì)算氣道形態(tài)學(xué)參數(shù)。
　　結(jié)果：<

5、br>　　(1)一般情況變化:A組大鼠在激發(fā)過程中或之后出現(xiàn)呼吸急促甚至喉間喘鳴、煩躁不安、二便失禁等癥狀，反復(fù)激發(fā)后出現(xiàn)毛發(fā)脫落、反應(yīng)遲緩、體重減輕或增長(zhǎng)緩慢，提示造模成功。D組及M組上述癥狀均較A組減輕，兩組間差異不明顯。C組無癥狀或較輕微。
　　(2)肺組織病理學(xué)改變:A組支氣管、血管周圍可見大量炎性細(xì)胞（如淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等）浸潤(rùn)，伴支氣管痙攣、上皮細(xì)胞脫落、氣道壁增厚、膠原沉積增加、粘液產(chǎn)生增

6、多，D組和M組上述改變均較A組減輕，兩組間差異不明顯。C組無明顯上述改變。
　　(3)BALF細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類計(jì)數(shù):A組、D組及M組的BALF細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞總數(shù)及比例、嗜酸性粒細(xì)胞比例、淋巴細(xì)胞比例均較C組明顯偏高(P＜0.01);D組及M組BALF細(xì)胞總數(shù)、PMN總數(shù)及比例、EOS比例、Ly比例均低于A組(P＜0.01);M組與D組間BALF細(xì)胞總數(shù)、PMN總數(shù)及比例、EOS比例及Ly比例差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。<

7、br>　　(4)Th17、Treg占CD4+淋巴細(xì)胞比例及相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平:C組、D組及M組的Th17細(xì)胞占CD4+淋巴細(xì)胞比例及IL-17表達(dá)水平均較A組明顯偏低(P＜0.01);A組、D組及M組的Treg細(xì)胞占CD4+淋巴細(xì)胞比率及IL-10表達(dá)水平均較C組明顯偏低(P＜0.01);D組與M組間Th17、Treg占CD4+淋巴細(xì)胞比率及IL-17、IL-10表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　(5)氣道形態(tài)學(xué)參

8、數(shù):C組、D組及M組的氣管壁厚度(Wat/Pbm)及平滑肌厚度(Wam/Pbm)均較A組明顯偏低(P＜0.01);D組與M組的Wat/Pbm及Wam/Pbm差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　(6)相關(guān)性分析:PMN比率與Th17比率及IL-17表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)（r=0.89、0.93，P＜0.01），與Treg比率及IL-10表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.84、-0.82，P＜0.01); EOS比率與Th17比率及I

9、L-17表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)(r=0.87、0.92，P＜0.01)，與Treg比率及IL-10表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.91、-0.82，P＜0.01);Wam/Pbm與Th17比率及IL-17表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)(r=0.77、0.79，P＜0.01)，與Treg比率及IL-10表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.76、-0.74，p＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　(1)哮喘大鼠存在Th17占優(yōu)勢(shì)的Th17/Treg失