RACK1條件性敲除對T細胞的影響.pdf

1、目的：探討RACK1基因?qū)π∈骉細胞發(fā)育、存活、活化、增殖等方面存在的影響。
　　方法：采用Cre-LoxP系統(tǒng)條件性敲除T細胞中的RACK1基因，得到RACK1在T細胞中特異缺失的小鼠（KO小鼠，同窩對照小鼠稱為WT小鼠）。利用流式細胞術檢測某些表面標記，如CD4，CD8，CD62L，CD44等，或者核因子Foxp3的表達水平變化，分析WT小鼠和KO小鼠T細胞在這些方面的差異。利用BrdU摻入和流式細胞術分析細胞增殖情況。利用A

2、nnexin V染色和流式細胞術分析細胞凋亡情況。構建嵌合體小鼠，將CD45.1+CD45.2+WT小鼠骨髓單個核細胞與CD45.1-CD45.2+的KO小鼠骨髓單個核細胞以1：1的比例通過尾靜脈注射入清髓后的CD45.1小鼠中，分析兩種來源的T細胞在完全相同環(huán)境下，是否仍呈現(xiàn)某些方面的差異。利用免疫印跡檢測小鼠T細胞內(nèi)自噬標志蛋白LC3BⅡ和促凋亡蛋白Bim的蛋白表達水平。
　　結果：1、KO小鼠外周CD4與CD8 T細胞的比例

3、及總數(shù)與WT小鼠相比均有不同程度的下降。嵌合體小鼠的數(shù)據(jù)證明，KO小鼠中外周T細胞的減少的確是細胞內(nèi)在缺陷導致的結果。然而在胸腺中，RACK1缺失不影響各發(fā)育階段T細胞的總數(shù)和比例，對Tregs發(fā)育也沒有影響。KO小鼠外周T細胞沒有異常增強的本底活化；但在李斯特菌感染后，KO小鼠來源的外周T細胞活化情況不同于WT小鼠來源的相應T細胞。說明RACK1基因敲除對T細胞活化存在影響。3、BrdU摻入實驗表明，嵌合體小鼠中KO小鼠來源的CD4

4、T細胞增殖比WT小鼠來源的CD4 T細胞低，說明RACK1可能影響了CD4 T細胞的增殖，但在CD8 T細胞中卻沒有明顯的區(qū)別。4、RACK1基因敲除后，遷出外周的T細胞內(nèi)過多的線粒體不能被清除，伴有凋亡顯著增多。免疫印跡結果顯示，RACK1缺失影響自噬標志性蛋白LC3B II和促凋亡蛋白Bim的蛋白量。
　　結論：在小鼠模型中，RACK1在T細胞中的特異缺失對T細胞在胸腺中的發(fā)育沒有明顯影響，但對T細胞的外周存活存在影響。其機制