阿爾茨海默病對小鼠認知功能及RACK1表達的近日節(jié)律影響.pdf

1、[目的]
　　檢測BalB/c小鼠認知功能的近日節(jié)律特點，并觀察阿爾茨海默病(Alzheimerdisease AD)對小鼠認知能力近日節(jié)律的影響，探究RACK1在小鼠海馬中的表達特點，并觀察AD對RACK1的表達影響。
　　[方法]
　　將52只BalB/c小鼠隨機分成3組，分別是AD模型組、鹽水對照組及空白對照組。在相同的實驗條件下，用ZB-200疲勞轉(zhuǎn)棒儀測3組小鼠在轉(zhuǎn)棒以上滯留時間;并對3個實驗組的小鼠分別在0

2、8:00、10:00、12:00、14:00、16:00、18:00、20:00、22:00、00:00、02:00、04:00、06:00進行水迷宮測認知能力，最后在12L/12D光照循環(huán)周期下（即08:00-20:00給予12小時的光照，20:00-第二天08:00全黑環(huán)境）進行自發(fā)性活動度的測定。上述實驗完成后，將2μl的0.5％氯化鋁注入AD組小鼠的側(cè)腦室中，1次/天，連續(xù)注射5天，以建立AD模型小鼠;同時將2μl的生理鹽水注入

3、鹽水對照組的小鼠側(cè)腦室中，1次/天，連續(xù)注射5天，建立鹽水對照模型小鼠;空白對照組不做任何處理。手術(shù)完后，給予相同飲食，喂養(yǎng)2周。2周后，再重復以上3個實驗。最后在ZT0、ZT6、ZT12及ZT18等4個時間點分別斷頭處死3組小鼠，迅速剝離小鼠的海馬，行病理切片，同時用免疫組化檢測各組小鼠海馬中的RACK1表達變化，并用熒光RT-PCR測各組小鼠海馬中RACK1不同時間點的表達情況。
　　[結(jié)果]
　　1.建模前，各組小鼠在

4、疲勞轉(zhuǎn)棒以上的滯留時間無差異（P＞0.05）;建模后，AD模型組的小鼠在疲勞轉(zhuǎn)棒儀上的滯留時間與其他兩組相比有顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.01)，但鹽水對照組與空白對照組之間無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，且AD模型組于建模后在疲勞轉(zhuǎn)棒儀上的滯留時間較建模前明顯減少，經(jīng)統(tǒng)計學處理后有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，而鹽水對照組和空白對照組在建模前后，其在轉(zhuǎn)棒儀上的滯留時間無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　2.建模前，各組小鼠的自發(fā)性活動度

5、在12D環(huán)境中均比在12L環(huán)境中的顯著增多，有顯著差異性(P＜0.05)，表現(xiàn)出近日節(jié)律的特點，且三組之間無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);建模后，AD組小鼠活動度的近日節(jié)律消失，與其他兩組相比有顯著統(tǒng)計學差異（P＜0.01），表現(xiàn)為白天活動增多，夜間活動顯著減少，而鹽水對照組及空白對照組小鼠的活動度仍表現(xiàn)近日節(jié)律的特點，與建模前相比無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　3.建模前，各組小鼠的水迷宮潛伏期隨時間變化而變化(P＜0.05)

6、，表現(xiàn)為白天潛伏期長，而夜晚則稍短，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，呈近日節(jié)律的特點;而在建模后，AD模型組的潛伏期在白晝均比其建模前延長，且近日節(jié)律的特點消失，其在白晝的潛伏期無差異性(P＞0.05);兩個對照組在建模后的潛伏期與建模前無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，且仍表現(xiàn)近日節(jié)律的特點。
　　4.HE染色觀察結(jié)果顯示:鹽水對照組和空白對照組小鼠海馬神經(jīng)元層排列整齊，細胞體積較大，細胞核大而圓，核仁明顯，AD模型組小鼠的海馬神經(jīng)元

7、數(shù)量有一定的減少，可見呈固縮狀的壞死神經(jīng)元，部分神經(jīng)元細胞質(zhì)內(nèi)有空化現(xiàn)象，并且神經(jīng)元細胞層排列紊亂。
　　5.免疫組化結(jié)果顯示:AD模型組的RACK1表達的陽性細胞的平均光密度值比其他兩組的小，有顯著性差異（P＜0.05）;但鹽水對照組和空白對照組的陽性細胞的平均光密度值比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　6.熒光RT-PCR結(jié)果顯示:AD模型組RACK1 mRNA的△CP與其他兩個對照組的△CP值相比明顯偏高，有統(tǒng)計學

8、意義(P＜0.05)，而空白對照組和鹽水對照組RACK1 mRNA的△CP相比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。將兩對照組的RT-PCR數(shù)據(jù)結(jié)果合成一組，并比較RACK1 mRNA在ZT0、ZT6、ZT12和ZT18表達情況，結(jié)果顯示:ZT0及ZT6之間的△CP比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，ZT12及ZT18之間的△CP比較亦無差異性(P＞0.05)，而ZT0與ZT12、ZT18之間的△CP比較及ZT6與ZT12、ZT18之間的△CP

9、比較均存在統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。AD模型組小鼠的RACK1 mRNA在ZT0、ZT6、ZT12及ZT18時間點的△CP比較均無差異性（P＞0.05）。
　　[結(jié)論]
　　1.本實驗利用0.5％氯化鋁成功建立了AD模型;并使用生理鹽水成功建立鹽水對照模型;
　　2.鹽水對照組小鼠的各項實驗結(jié)果提示手術(shù)本身對小鼠沒有產(chǎn)生影響;
　　3.正常情況下的小鼠，其自發(fā)性活動度及認知功能均呈近日節(jié)律的特點;AD使小鼠的體