冬凌草甲素改善阿爾茨海默病模型小鼠認(rèn)知功能及機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一種致死性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，是導(dǎo)致老年癡呆的最主要原因，其主要臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性學(xué)習(xí)記憶損傷和認(rèn)知功能障礙，典型病理特征包括細(xì)胞外β-淀粉樣蛋白(Amyloid-β，Aβ)沉積成老年斑以及細(xì)胞內(nèi)過(guò)度磷酸化的Tau蛋白形成神經(jīng)纖維纏結(jié)（Neurofibrillary Tangles，NFTs）。目前認(rèn)為Aβ級(jí)聯(lián)假說(shuō)是AD最重要的發(fā)病機(jī)制，而越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)Aβ誘

2、導(dǎo)的突觸丟失和神經(jīng)炎癥在AD的進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。
　　目的:(1)觀察冬凌草甲素（Oridonin，Ori）對(duì)AD模型小鼠認(rèn)知功能障礙的影響;(2)體內(nèi)外研究Ori對(duì)Aβ1-42誘導(dǎo)的突觸丟失的影響及其機(jī)制;(3)體內(nèi)研究Ori對(duì)Aβ1-42誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥的影響及其機(jī)制。
　　方法:(1)以立體定位法將Aβ1-42注射至C57BL/6(B6)小鼠雙側(cè)海馬內(nèi)以制備AD小鼠模型，Aβ1-42處理原代培養(yǎng)的小鼠皮層神經(jīng)元為體外A

3、D模型，體內(nèi)外均隨機(jī)建立AD模型組及Ori治療組。利用水迷宮檢測(cè)Ori能否改善AD模型小鼠認(rèn)知功能障礙。(2)第一部分利用Western blot及免疫熒光分析Ori對(duì)體內(nèi)及體外AD模型中突觸標(biāo)記物PSD-95和synaptophysin的影響，MTT檢測(cè)Ori處理AD模型小鼠突觸小體活性的變化，Golgi染色觀察小鼠海馬內(nèi)樹(shù)突形態(tài)的變化，Western blot及免疫熒光檢測(cè)Ori能否激活海馬內(nèi)BDNF/TrkB/CREB信號(hào)通路;(

4、3)第二部分利用RT-PCR和Western blot檢測(cè)Ori處理的AD模型小鼠海馬內(nèi)炎癥因子mRNA和蛋白表達(dá)水平，免疫熒光分析小膠質(zhì)細(xì)胞和星型膠質(zhì)細(xì)胞的激活狀況，Western blot檢測(cè)線粒體的損傷情況以及Ori能否抑制NF-κB通路的激活。
　　結(jié)果:(1)行為學(xué)結(jié)果顯示Ori顯著降低AD模型小鼠逃避潛伏期和上臺(tái)前搜索距離，并增加其穿越平臺(tái)的次數(shù);Western blot及免疫熒光結(jié)果顯示Ori上調(diào)體內(nèi)外AD模型中PS

5、D-95和synaptophysin的表達(dá);Golgi染色結(jié)果顯示Ori增加AD小鼠海馬內(nèi)樹(shù)突長(zhǎng)度及分叉，并增加樹(shù)突棘的數(shù)量;此外，Ori上調(diào)AD小鼠突觸小體內(nèi)PSD-95和synaptophysin的表達(dá)，MTT結(jié)果顯示Ori可提高突觸小體活性;Western blot及免疫熒光結(jié)果顯示Ori可激活海馬內(nèi)BDNF/TrkB/CREB信號(hào)通路。(2) RT-PCR及Western blot結(jié)果顯示Ori可抑制AD模型小鼠海馬內(nèi)炎癥因子的