超順磁性殼聚糖質粒(pDsVEGF165Redl-N1)明膠控釋微球修復顱骨缺損的實驗研究.pdf

1、目的：觀察振蕩磁場下超順磁性殼聚糖質粒(pDsVEGF165Red1-N1)明膠微球(SPCPGM)與磷酸鈣骨水泥復合的生物材料修復顱骨缺損的作用,初步探討其成骨效果和臨床應用價值。
　　 方法：(1)制備血管內皮細胞生長因子(VEGF)質粒(pDsVEGF165Red1-N1)。用HandⅢ、SacⅡ進行雙酶切,然后以瓊脂糖凝膠電泳驗證。以SmartSpecTM3000核酸蛋白測定儀測量質粒濃度和純度。(2)化學共沉淀法制作超

2、順磁性殼聚糖納米微球(SPFCN),用振動樣品磁強計儀測定SPFCN的磁性強度。(3)制備超順磁性殼聚糖質粒(pDsVEGF165Red1-N1)復合物(SPCPN)。(4)乳化交聯(lián)法制作超順磁性殼聚糖明膠微球(SPCGM)及超順磁性殼聚糖質粒明膠微球(SPCPGM)。將自固化磷酸鈣骨水泥(CPC)與以乳化交聯(lián)法制備的單純明膠微球按7.5％(w/w)比例的混合制備多孔的仿兔顱骨骨缺損的復合支架,將一定量的SPCPGM和SPCGM微球分別

3、與支架復合。(5)新西蘭大白兔60只,隨機分為空白支架組(A組);支架+SPCPGM組(B組);支架+SPCGM+振蕩磁場組(C組);支架+SPCGM組(D組);支架+SPCPGM+振蕩磁場組(E組)。分別于術后2周、4周、8周、12周通過大體觀察;X線檢測;組織切片顯微形態(tài)觀察:用計算機圖像分析系統(tǒng)分析;并用求積儀對兔顱骨缺損處成骨情況進行測定;將數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析,評估各組成骨的情況。
　　 結果：(1)質粒(pDsVEGF

4、165)經HandⅢ和SacⅡ雙酶切瓊脂糖凝膠電泳證實為所需質粒;以SmartSpecTM3000核酸蛋白測定儀測得質粒(VEGF165)的濃度為1.48±0.05mg/ml。(2)振動樣品磁強計檢測證實所制備的SPFCN具有超順磁性,氮含量為0.0054mg/L。(3)振蕩磁場下SPCPGM人工骨促進成骨的體內實驗研究表明:(1)E組血管化和成骨作用效果優(yōu)于其它4組,4周時可見支架開始降解吸收并見新生骨。(2)各組成骨情況:E組大量成