膠原-殼聚糖—明膠微球支架緩釋三七皂甙Rg1促血管化研究.pdf

1、目的:
　　探索中藥單體三七皂甙Rg1對血管內皮細胞生物活性影響及機制，為其促血管化、協(xié)同治療提供依據(jù)。構建有效的復合三七皂甙Rg1的膠原/殼聚糖-明膠微球支架緩釋體系，評價與探索三七皂甙Rg1在促進組織工程皮膚血管化中的作用及相關機制，為組織工程促血管化策略提供新的思路。
　　方法:
　　各種急、慢性損傷造成的皮膚缺損是亟待有效解決的重大臨床問題之一。組織工程化皮膚為皮膚創(chuàng)面的修復和愈合提供了一嶄新的治療途徑，但是目

2、前各種組織工程化皮膚移植存活率較低，其中一個主要原因是組織工程化皮膚移植后血管化速度較慢。因此尋求有效促進組織工程移植物血管化的方法尤為重要。三七作為一種常見的活血化瘀中藥具有良好的促血管生成作用，這一作用主要是由其有效成分三七皂甙Rg1主導的。前期研究證實膠原/殼聚糖支架具有良好的機械支持作用和促進組織、血管長入的作用，而明膠微球作為一種緩釋載體技術已經(jīng)非常成熟。因此我們首先通過對內皮細胞增殖和凋亡，遷移，小管形成的作用，流式細胞術檢

3、測細胞周期和凋亡率，HUVEC細胞的VEGF表達探索三七皂甙Rg1對HUVEC細胞血管生成的影響及機制。為了使Rg1能最好的應用于組織工程，我們構建了緩釋三七皂甙Rg1的膠原/殼聚糖-明膠微球(CC-GMS)支架，并通過體外實驗對這種支架的微觀形貌、緩釋性能以及緩釋出的Rg1對HUVEC細胞增殖能力影響進行評價。為進一步表征緩釋Rg1的CC-GMS支架對血管化及誘導再生的影響，我們采用SD大鼠埋植實驗模型，分別采用組織病理技術、免疫組化

4、和免疫熒光技術及分子生物學技術對組織反應性和促血管化因子的表達進行了評價。
　　結論:
　　三七皂甙Rg1有良好的促進HUVEC細胞增殖，遷移，管形成作用。Rg1增加HUVEC細胞周期中G2/M期和S期的比例，并未引起內皮細胞的凋亡。同時三七皂甙Rg1可上調HUVEC細胞VEGF表達。構建的CC-GMS支架具有很好的組織相容性并能持續(xù)釋放活性的Rg1。構建的緩釋Rg1的CC-GMS支架在體內具有良好的促血管化作用，作為組織工