殼聚糖基引導組織再生膜對大鼠顱骨缺損的修復作用.pdf

1、目的:骨組織工程發(fā)展迅速，其結合材料學和生物學技術，通過構建人工支架或引導組織再生膜來輔助完成自體骨的再生，具有材料來源廣泛，感染、排斥等并發(fā)癥少的優(yōu)點，有望在將來取代傳統(tǒng)的骨修復方法。目前，臨床上所用的引導組織再生膜分為再生膜和不可再生膜，不可再生膜因需要二次手術且易感染給患者帶來不便，可再生膜存在降解速度不能調控，且機械強度不足而不能起到支撐作用的問題。羧甲基殼聚糖在水溶液中以兩性電解質的形式存在，可以形成不同的空間構象，從而賦予其

2、很多特殊的生物學活性，是一種適用于GTR膜片的潛在生物材料。但是，由于羧甲基殼聚糖膜易溶于水，且降解速度快，所以本研究欲尋找一種合適的交聯(lián)方法構建一種符合要求的GTR膜材料，并驗證其有效性。
　　方法:通過全骨髓法純化大鼠骨髓間充質干細胞(BMSCs)，MTT實驗測試羧甲基殼聚糖、磺酸化殼聚糖、硫酸軟骨素和N-乙酰氨基葡萄糖對BMSCs增殖的促進作用，篩選出最優(yōu)材料構建GTR膜;通過MTT法確定納米羥基磷灰石(Nano-HA)的添

3、加比例后，采用CaCl2和雙縮水甘油醚雙交聯(lián)，通過相轉化法制備了一種不對稱膜，并測定了膜片的吸水性、溶脹性、孔隙率、拉伸強度、斷裂伸長率和細胞相容性;通過將膜片植入大鼠背部皮下和腿部肌肉來驗證膜片的體內降解特性和組織相容性;構建大鼠極限顱骨缺損模型，將膜片敷在缺損處驗證其對骨缺損的修復作用，于第4周、8周、12周處死大鼠，取缺損處組織，脫鈣、固定后行HE染色和Masson染色。
　　結果:利用全骨髓法可以純化出BMSCs，MTT實

4、驗證實羧甲基殼聚糖和硫酸軟骨素對BMSCs具有促進作用;通過MTT法確定Nano-HA的最佳添加比例為10％;通過CaCl2和1，4-丁二醇雙縮水甘油醚雙交聯(lián)相轉化法構建的不對稱膜片吸水率為360.69％，溶脹比為174.41％，拉伸強度為0.640MPa，斷裂伸長率為54.424％，細胞毒性實驗顯示材料的細胞毒性為1級，細胞相容性實驗顯示細胞可在膜片上貼附、伸展、增殖;體內植入實驗顯示，膜片在體內至少可完整保持8周，在第1周和第2周有

5、輕微的炎癥反應，第4周炎癥反應消失，表明具有良好的生物降解性能和組織相容性;大鼠極限顱骨缺損實驗顯示，實驗組在第4周有一定的新骨生成，第8周新骨貫穿缺損區(qū)域，但相對較薄，第12周缺損基本修復完成，對照組缺損區(qū)域被纖維結締組織侵入，第12周時僅有少量新骨生成。
　　結論:羧甲基殼聚糖和硫酸軟骨素有促進BMSCs增殖的作用，加入Nano-HA，通過雙交聯(lián)利用相轉化法所構建的不對稱膜片具有良好的細胞相容性、組織相容性和生物降解性，且通過