油菜LACS1基因和油菜LACS4基因的克隆與鑒定.pdf

1、長鏈?；o酶A合成酶(LACS)把游離脂肪酸活化成為酰基輔酶A，從而在生物的脂肪酸的合成代謝和分解代謝中起著重要的作用。這類重要的酶參與了若干種與脂肪酸相關(guān)的代謝，包括磷脂、甘油三脂、茉莉酸的生物合成以及脂肪酸的β-氧化等。在油料作物中克隆、分析和鑒定LACS對(duì)于油脂代謝的研究具有重要意義。
　　 本研究中利用擬南芥LACS1(AtLACS1)基因?yàn)樘结?，通過RACE技術(shù)，在油菜花的cDNA中克隆出一個(gè)全長為2334 bp的LA

2、CS基因，命名為BnLACS1，并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明，BnLACS1含有一個(gè)長度為1983 bp的開放閱讀框(ORF)，預(yù)測(cè)編碼一個(gè)含有660個(gè)氨基酸殘基的蛋白。序列分析顯示，BnLACS1屬于AMP-綁定蛋白(AMPBP)超家族，編碼蛋白序列同AtLACS1具有高度的一致性。BnLACS1序列已遞交GenBank數(shù)據(jù)庫(Acc.No.EU375561)。
　　 為了鑒定BnLACS1的功能，進(jìn)行了酵母互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)。結(jié)

3、果證明BnLACS1編碼LACS活性。底物偏好性分析表明，長鏈脂肪酸和飽和脂肪酸是BnLACS1偏好的底物。使用RT-PCR對(duì)BnLACS1進(jìn)行了表達(dá)分析，發(fā)現(xiàn)BnLACS1在成熟的花和莖中有大量表達(dá)，而在萌發(fā)期的幼苗中沒有表達(dá)。BnLACS1在同含油量油菜品系的角果皮和種子的表達(dá)水平也存在差異。這些結(jié)果說明，BnLACS1可能參與油菜油脂的合成，并且影響到種子的含油量。
　　 在本研究中，構(gòu)建了BnLACS1的植物表達(dá)載體，并

4、進(jìn)行了轉(zhuǎn)化油菜。為下一步的檢測(cè)BnLACS1在油菜中過量表達(dá)引起的表型提供了基礎(chǔ)。
　　 另一個(gè)油菜LACS基因以AtLACS4為探針，通過電子克隆得到，命名為BnLACS4。該基因長2,270 bp，含有2,004 bp的ORF。對(duì)進(jìn)BnLACS4行生物信息學(xué)分析，表明BnLACS4編碼一個(gè)含有667個(gè)氨基酸殘基的蛋白。序列分析顯示，BnLACS4具有真核生物L(fēng)ACS的分子特征。表達(dá)分析顯示，BnLACS4在根、莖、葉、花中都