多肽：N-乙酰氨基半乳糖轉移酶-2的克隆、分布和酶家族基因芯片的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該文選擇人類中發(fā)現(xiàn)最早的ppGAlNAc-T2為代表,從人腦基因庫中將其克隆和鑒定,并用RT-PCR和原位PCR研究它在六種細胞株和六種正常人體組織中的分布和定位,最后制備了以上14種ppGalNAc-T的基因片段,制成基因芯片,比較胃癌細胞和神經(jīng)膠質瘤細胞中14種ppGalNAc-T的表達譜.該文共分三個部分.第一部分 多肽:N-乙酰氨基半乳糖轉移酶-2的基因克隆,序列鑒定及其在大腸桿菌的初步表達;從人腦基因文庫中克隆出ppGalNA

2、c-T2的可溶性部分(高爾基體腔內的莖部和催化結構域),其cDNA片段長度為1563bp(為5'端第154-1716位核苷酸),以pDONR<'TM>201質粒轉入原核表達質粒pFASTBAC中,兩個重組質粒均經(jīng)線性化長度鑒定,加以克隆PCR或酶切鑒定,測得插入ppGalNAc-T2片段的長度也約1.56kb.將pDONR<'MT> 201/T2重組質粒進行測序,去除終止密碼后,衍生出的氨基酸序列與文獻報導的ppGalNAc-T2相符.

3、并且pFASTBAC/T2質?？稍诖竽c桿菌中表達出59.2kDa的蛋白質產物,其分子量與520個氨基酸序列計算的結果相同.第二部分 多肽:N-乙酰氨基半乳糖轉移酶-2在不同細胞和組織中的表達;用RT-PCR兩步及一步法分別測定了六個細胞株和六種正常人體組織中ppGalNAc-T2 mRNA的表達.第三部分 多肽:N-乙酰氨基半乳糖轉移酶家族表達譜的基因芯片研究;用合成的14對正、反向引物,以人結腸、腦等組織cDNA庫為模板,采用PCR法

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