大鼠腦缺血性損傷后血清CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞和腦組織Foxp3的表達變化及與NSS評分相關(guān)性分析.pdf

1、目的:
　　Foxp3轉(zhuǎn)錄因子在大腦中樞神經(jīng)的傳遞過程中發(fā)揮著極其關(guān)鍵的功能。Foxp3轉(zhuǎn)錄因子不僅可以結(jié)合其他類的神經(jīng)性遞質(zhì)同時參與大腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)的相關(guān)物質(zhì)的神經(jīng)傳遞效應，除此之外，F(xiàn)oxp3轉(zhuǎn)錄因子還在行為活動，人體的情緒變化甚至機體的食欲調(diào)節(jié)等各個方面起到至關(guān)重要的作用?？傊跈C體內(nèi)部，無論是Foxp3轉(zhuǎn)錄因子的合成，還是該物質(zhì)在體內(nèi)的釋放，或者轉(zhuǎn)運以及再攝取等所有環(huán)節(jié)的每一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)異常均會會表現(xiàn)出神經(jīng)系統(tǒng)異常的癥狀。

2、
　　最近十年，基礎研究也越來越深入機體的調(diào)節(jié)性T細胞的含量與腫瘤、神經(jīng)外傷性疾病以及自身免疫性疾病的發(fā)生的相關(guān)性研究。特別是關(guān)于CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞和Foxp3轉(zhuǎn)錄因子的含量變化與相關(guān)疾病的關(guān)系成為近幾年研究的熱點和難點問題。有關(guān)腦組織受損程度與CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞的含量和Foxp3轉(zhuǎn)錄因子的表達之間的關(guān)系的相關(guān)系統(tǒng)研究還不是很多，特別是有關(guān)的基礎性動物實驗研究的更少，關(guān)于腦組織受損后，動物體內(nèi)血清中CD4+

3、CD25+調(diào)節(jié)性T細胞和Foxp3轉(zhuǎn)錄因子的表達變化與發(fā)病的機制及進程目前還不是很清楚。
　　為確定腦損傷大鼠和正常大鼠的神經(jīng)功能缺損詳細評分(NeurologicalSeverity Scores，NSS)與體內(nèi)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞和Foxp3水平之間的相關(guān)性，我們利用一個大鼠腦損傷模型測定NSS評分，外周血CD4+CD25+T細胞數(shù)量以及腦組織Foxp3表達，分析腦損傷進程對于上述各參數(shù)的影響并最終確定他們之間的相關(guān)

4、性。該研究可為今后針對腦組織受損而引起的相關(guān)癥狀的治療提供一定的科學支撐。
　　方法:
　　1實驗方法:實驗隨機分為兩大組，每組20只大鼠。根據(jù)Zea-Longer插線方法的改良技術(shù)，造成大鼠右側(cè)大腦中動脈缺血建立腦組織受損的動物模型。分別于實驗第1、3、7、14天分別處死5只。通過不同組別不同時間點大鼠進行NSS評分，同時應用流式細胞術(shù)測定外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞以及免疫組化檢測腦組織中Foxp3轉(zhuǎn)錄因子的表

5、達，研究大鼠腦組織受損后外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞以及Foxp3轉(zhuǎn)錄因子表達的變化并確定其相關(guān)性。
　　2統(tǒng)計學方法:本文所有數(shù)據(jù)均采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件分析。計數(shù)資料的分析采用Fisher以及x2檢驗。多組均值分析使用ANOVA方差分析。相關(guān)性分析采用Spearman分級相關(guān)性分析以及多元分布回歸。設定檢驗水準α=0.05。
　　結(jié)果:
　　1實驗組大鼠在腦組織受損側(cè)的大腦的基底節(jié)區(qū)以及大腦皮層部出

6、現(xiàn)白色腦組織梗死的跡象，而對照組大鼠腦組織未出現(xiàn)梗死的跡象，表明實驗動物模型制備成功。
　　2實驗組和對照組兩組大鼠的各個時間點的神經(jīng)功能缺損評分差異存在有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。對于實驗組的大鼠，在腦組織受損后的不同時間點，其NSS評分也存在有差異性（P＜0.05）。
　　3實驗組和對照組的大鼠出現(xiàn)的NSS量表評分的差異存在有統(tǒng)計學意義，實驗組的大鼠NSS量表的得分明顯高于對照組(P＜0.05)。
　　4在實驗組

7、和對照組大鼠兩組模型制備成功后的第1天和第3天時，實驗組大鼠與對照組大鼠的外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞含量差異不顯著(P＞0.05)，然而，在第7天和第14天時，實驗組大鼠外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞的含量顯著高于對照組(P＜0.05)。
　　5實驗組大鼠外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞含量在不同的時間點，存在有顯著性差異(P＜0.05)，對照組大鼠外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞含量在不同的時間點

8、差異沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　6實驗組大鼠的腦組織中可見有梗死病灶，腦組織受損的區(qū)域呈現(xiàn)出典型的缺血性病理改變，周圍正常腦組織與病變部位組織之間的界線非常清楚，通過進一步觀察可以發(fā)現(xiàn):腦組織受損的部位壞死范圍內(nèi)，可見有大量的腦神經(jīng)細胞因缺血而出現(xiàn)不同程度的壞死，其中絕大多數(shù)腦神經(jīng)細胞的結(jié)構(gòu)已經(jīng)消失，并且難以辨認腦組織部位的神經(jīng)元外形，腦組織受損部位的神經(jīng)細胞數(shù)目出現(xiàn)不同程度的減少，腦神經(jīng)細胞的胞漿呈現(xiàn)出空泡樣的變性。<

9、br>　　7在實驗組的動物模型制作成功后的第1天、第3天、第7天和第14天時均可以檢測到腦組織的受損部位有Foxp3的表達，F(xiàn)oxp3分布的范圍主要集中在腦組織受損的周邊區(qū)域，雖然在正常的腦組織組織部位也出現(xiàn)Foxp3的表達，但只有較少的數(shù)量。在對照組在動物模型制作成功后的第1天、第3天、第7天、第14天腦組織中未見明顯Foxp3的表達。
　　8在動物模型制備成功后的第1天、第3天、第7天和第14天四個時間點，NSS評分與實驗組大

10、鼠外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞的表達有負相關(guān)關(guān)系(P＜0.05)。
　　9將研究對象血液中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞含量以及腦組織中Foxp3表達等因素作為自變量，而將大鼠NSS得分分值評分作為應變量，進行多元逐步回歸分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn):MCD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞、腦組織中Foxp3進入回歸方程，表明CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞、腦組織中Foxp3對大鼠NSS得分分值有較大影響。
　　結(jié)論:
　　1大

11、鼠腦組織受損后，血液中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞的含量，在受損后的不同時期存在著動態(tài)變化，表明CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞參與大鼠腦組織受損后病理生理發(fā)生以及發(fā)展過程。
　　2大鼠腦組織受損部位Foxp3的表達與腦組織受損的形成具有密切的關(guān)聯(lián)性，F(xiàn)oxp3的表達主要集中在受損的病灶以及周邊區(qū)域;
　　3大鼠腦組織受損后，局部腦組織的神經(jīng)元胞體可出現(xiàn)縮小，胞核深染、固縮，以及神經(jīng)細胞出現(xiàn)大量缺血壞死的現(xiàn)象;伴有大部分細胞