地塞米松通過調(diào)控細(xì)胞自噬和凋亡減輕海水吸入型肺損傷的機(jī)制研究.pdf

1、研究背景：
　　淹溺是引起意外死亡最重要的原因之一，并且造成了社會(huì)衛(wèi)生系統(tǒng)巨大的負(fù)擔(dān)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，淹溺每年可引起近40萬人死亡，這其中海水淹溺占據(jù)了很大一部分。盡管經(jīng)過了幾十年的研究，海水淹溺的死亡率仍居高不下。淹溺過程中海水的吸入會(huì)引起急性肺損傷（acute lung injury，ALI）和急性呼吸窘迫綜合癥（acute respiratory distress syndrome）的發(fā)生。海水吸入導(dǎo)致的急性肺損傷最主要的特點(diǎn)是炎癥

2、介質(zhì)的上調(diào)、嚴(yán)重的呼吸困難和缺氧以及肺水腫。在海水吸入型肺損傷的動(dòng)物模型中，滲入到肺泡腔中的炎癥細(xì)胞會(huì)釋放很多種類分子，例如炎癥因子和活性氧，這些分子促進(jìn)了肺組織的炎癥損傷。另外，海水刺激誘導(dǎo)了肺泡上皮細(xì)胞的凋亡，引起了肺組織屏障的破壞。
　　自噬（autophagy）控制著細(xì)胞內(nèi)長壽蛋白、蛋白質(zhì)聚集體以及入侵微生物的降解，并可能參與調(diào)控炎癥反應(yīng)。另外，有研究證實(shí)自噬與細(xì)胞凋亡有密切的聯(lián)系。然而，在海水吸入型肺損傷中自噬的發(fā)生及其

3、與炎癥和凋亡的關(guān)系仍不明確。此外，地塞米松已經(jīng)被證實(shí)對(duì)于海水吸入肺損傷有著明顯的治療效果，但是其對(duì)于自噬反應(yīng)的調(diào)節(jié)的藥理效果并不明確。本實(shí)驗(yàn)通過復(fù)制大鼠海水吸入型肺損傷的模型，觀察自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)，并通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步研究地塞米松對(duì)自噬的影響以及與炎癥和凋亡的關(guān)系。
　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br>　　1．觀察海水淹溺肺損傷模型中炎癥因子、凋亡相關(guān)蛋白和自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。
　　2．探討海水吸入肺損傷中地塞米松對(duì)自噬的影響以及

4、與炎癥和凋亡的關(guān)系。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　實(shí)驗(yàn)一：
　　40只SD大鼠隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組、海水處理1 h、3 h、6 h、12 h組。分別在各時(shí)間點(diǎn)測量每組大鼠 PaO2、PaCO2、SaO2以及肺損傷、肺組織炎癥因子（TNF-α、IL-1β和IL-8）含量，肺組織濕干比（W/D）、自噬相關(guān)蛋白ATG5、Beclin1、LC3Ⅱ和凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3表達(dá)的變化。

5、>　　實(shí)驗(yàn)二：
　　A549細(xì)胞分為5組：空白對(duì)照組、海水處理6 h組，雷帕霉素+海水處理6 h組，地塞米松+海水處理6 h組，3-MA+海水處理6 h組。檢測各組細(xì)胞GFP-LC3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率，流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞凋亡情況，檢測各組細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白ATG5、Beclin1、LC3Ⅱ和凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3表達(dá)的變化以及炎癥因子（TNF-α、IL-1β和IL-8）含量。
　　實(shí)驗(yàn)

6、結(jié)果：
　　實(shí)驗(yàn)一：
　　大鼠海水吸入后，PaO2和SaO2明顯降低，1 h后達(dá)到最低值，PaCO2和濕干比明顯升高，1 h后達(dá)最高值。海水吸入6h后，肺組織出現(xiàn)了明顯的肺水腫，炎癥細(xì)胞浸潤，而且炎癥因子表達(dá)明顯升高。另外，自噬相關(guān)蛋白ATG5、Beclin1、LC3Ⅱ和凋亡相關(guān)蛋白Bax、cleaved caspase-3的表達(dá)也顯著增加，同時(shí)凋亡抑制基因Bcl-2的蛋白表達(dá)顯著降低。
　　實(shí)驗(yàn)二：
　　在A5

7、49細(xì)胞中，雷帕霉素和地塞米松誘導(dǎo)了海水引起的GFP-LC3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率的增加以及自噬相關(guān)蛋白ATG5、Beclin1、LC3Ⅱ的表達(dá)，抑制了海水刺激引起的細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3表達(dá)以及炎癥因子（TNF-α、IL-1β和IL-8）表達(dá)的增加。而3-MA則起到了相反的作用。
　　結(jié)論：
　　1．在海水吸入肺損傷模型中，炎癥因子、凋亡相關(guān)蛋白和自噬相關(guān)蛋白表達(dá)增加。
　　2．