橙皮素后處理通過(guò)抑制自噬與凋亡減輕心肌缺血再灌注損傷.pdf

1、及時(shí)恢復(fù)急性心肌梗死(AMI)患者冠脈血流是挽救缺血心肌的根本措施，但缺血心肌在迅速恢復(fù)血流的同時(shí)會(huì)出現(xiàn)再灌注損傷。自噬廣泛存在于真核細(xì)胞中，是細(xì)胞自我消化及更新的過(guò)程，自噬在心肌缺血/再灌注(I/R)誘導(dǎo)的心肌損傷中起著重要調(diào)節(jié)作用。橙皮苷(HES)，柑橘類(lèi)水果提取物，對(duì)不同器官缺血/再灌注損傷具有保護(hù)作用，但是橙皮苷在心肌缺血/再灌注損傷過(guò)程中的作用尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。橙皮素(hesperetin，HPT)是橙皮苷的活性代謝產(chǎn)物，具有強(qiáng)

2、烈的抗炎癥、抗氧化及抗腫瘤的作用。此外，研究報(bào)道其在心血管系統(tǒng)中有抗血栓的潛在效果，但橙皮素在心肌I/R損傷過(guò)程中的作用及機(jī)制尚未清楚。在本研究實(shí)驗(yàn)，將研究橙皮素后處理對(duì)心肌I/R損傷過(guò)程中自噬的調(diào)節(jié)作用及其潛在機(jī)制。實(shí)驗(yàn)利用體內(nèi)C57BL/6小鼠心肌I/R損傷模型和體外新生SD大鼠原代心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧(H/R)損傷模型。通過(guò)結(jié)扎小鼠的冠狀動(dòng)脈左前降支30min，接著解除結(jié)扎線(xiàn)恢復(fù)心肌血流再灌注120min，模擬心肌I/R損傷;而在體

3、外模擬原代心肌細(xì)胞H/R損傷是通過(guò)將心肌細(xì)胞中含胎牛血清培養(yǎng)基換成PBS缺氧3h，接著又換成含胎牛血清培養(yǎng)基復(fù)氧3h。通過(guò)TTC/伊文氏藍(lán)染色法測(cè)定心肌I/R過(guò)程中HPT后處理對(duì)C57BL/6小鼠心肌梗死面積;MTS法測(cè)定H/R過(guò)程中HPT后處理對(duì)新生SD大鼠原代心肌細(xì)胞活性的影響;Western blot法檢測(cè)自噬與凋亡的標(biāo)記蛋白;透射電子顯微鏡(TEM)觀察自噬小體數(shù)量及細(xì)胞線(xiàn)粒體的超微結(jié)構(gòu)變化;免疫熒光染色法檢測(cè)自噬標(biāo)記蛋白LC3

4、。HPT后處理減少I(mǎi)瓜過(guò)程心肌梗死面積及H/R過(guò)程原代心肌細(xì)胞死亡;Western blot顯示LC3BⅡ減少、LC3BⅡ/Ⅰ比值降低，Beclin1降低，p62增加;TEM顯示自噬小體數(shù)量減少;免疫熒光染色顯示LC3減少。這些結(jié)果提示HPT后處理保護(hù)心肌I/R損傷，抑制I/R過(guò)程中細(xì)胞自噬。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探索HPT后處理抑制自噬的具體信號(hào)通路，western blot顯示PI3K，Akt,mTOR蛋白的磷酸化水平增加，通過(guò)加入LY