黃連素通過抑制細(xì)胞凋亡和自噬減輕大鼠肝缺血再灌注損傷的研究.pdf

1、目的:通過建立大鼠缺血再灌注損傷模型，觀察在缺血再灌注損傷后大鼠肝臟結(jié)構(gòu)、功能及相關(guān)炎性因子表達(dá)的變化，同時(shí)觀察及探討凋亡及自噬在肝臟缺血再灌注過程中扮演的角色和起到的作用。探究黃連素在肝缺血再灌注損傷中所具有的作用，進(jìn)而為在臨床工作中，減輕手術(shù)后肝臟缺血再灌注損傷提供理論支持及可能有效的藥物治療方法。
　　方法:實(shí)驗(yàn)分組:1.采用健康、清潔SD大鼠54只，周齡8-12周，體重250-280g，雌雄不論，隨機(jī)分成3組。分別為假手術(shù)

2、組大鼠(SHAM組)，缺血再灌注組大鼠(HIRI組)，黃連素干預(yù)缺血再灌注組大鼠(HIRI+BER組)。每組18只大鼠。SHAM組大鼠僅行開關(guān)腹手術(shù)操作，不作肝臟缺血操作，HIRI組大鼠行肝臟缺血再灌注手術(shù)，缺血時(shí)間為60min，HIRI+BER組大鼠手術(shù)前連續(xù)14天給予黃連素(60 mg/kg)灌胃，每天一次，亦行缺血再灌注手術(shù)，缺血時(shí)間為60min。
　　監(jiān)測三組SD大鼠術(shù)后相關(guān)指標(biāo)的變化情況，分別將三組大鼠分為三個(gè)時(shí)間段，為

3、1H，6H，12H三個(gè)時(shí)間段，每個(gè)時(shí)間段分為6只大鼠。取肝臟左外葉及抽取大鼠靜脈血作為檢測標(biāo)本，檢測血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)指標(biāo)含量。ELISA法檢測炎性因子HMGB1，IL-6，TNF-a。Westem Blot分析肝臟組織中自噬及凋亡相關(guān)蛋白Bax，Beclin-1，Bcl-2，Caspase-3，Caspase-7等的表達(dá)情況，對肝臟進(jìn)行HE染色，觀察肝細(xì)胞顯微結(jié)構(gòu)的改變情況。
　　結(jié)果:
　　

4、1.手術(shù)后大鼠蘇醒，翻身，并能維持有效呼吸、心跳表明手術(shù)成功。
　　2.肝臟促凋亡相關(guān)蛋白Bax、Caspase3、7的表達(dá)，三個(gè)時(shí)間段中大鼠:SHAM組較HIRI組及HIRI+BER組顯著降低(P＜0.05)，HIRI+BER組較HIRI組明顯降低(P＜0.05)。肝臟抑制凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2的表達(dá)，三個(gè)時(shí)間段中大鼠:SHAM組較HIRI組及HIRI+BER組顯著升高(P＜0.05)，HIRI+BER組較HIRI組明顯升高(P

5、＜0.05)。觀察肝臟組織中自噬標(biāo)記物相關(guān)蛋白Beclin-1的表達(dá)，三個(gè)時(shí)間段中大鼠:SHAM組較HIRI組及HIRI+BER組顯著降低(P＜0.05)，HIRI+BER組較HIRI組明顯降低(P＜0.05)。
　　3.血清ALT和AST水平的變化:血清ALT、AST指標(biāo)是臨床上反應(yīng)肝臟功能的重要指標(biāo)，三個(gè)時(shí)間段中大鼠:對比SHAM組，HIRI組以及HIRI+BER組的血清ALT和AST水平顯著升高(P＜0.05)，血清轉(zhuǎn)氨酶指

6、標(biāo)在恢復(fù)灌注6H后達(dá)到高峰，過后回落。HIRI+BER組與HIRI組比較，血清ALT和AST水平降低明顯(P＜0.05)。
　　4.血清中炎性因子HMGB1、IL-6、TNF-a的指標(biāo)，三個(gè)時(shí)間段中大鼠:HIRI組和HIRI+BER組，HMGB1、IL-6、TNF-a指標(biāo)較SHAM組明顯升高(P＜0.05)。與HIRI組比較，HIRI+BER組HMGB1、IL-6、TNF-a指標(biāo)明顯降(P＜0.05)。
　　5.肝臟組織HE

7、染色觀察:SHAM組大鼠肝臟細(xì)胞形態(tài)正常，結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞索排列整齊。再灌注1H組大鼠:可見HIRI組大鼠肝細(xì)胞輕度腫脹， HIRI+BER組大鼠肝細(xì)胞無明顯損傷;再灌注6H組大鼠:可見HIRI組大鼠肝細(xì)胞中重度水腫，肝索結(jié)構(gòu)排列紊亂，局部可見氣球樣變性及壞死，可見較多炎性細(xì)胞浸潤。HIRI+BER組大鼠肝細(xì)胞輕度水腫，局部見少量的肝細(xì)胞變性、壞死。再灌注12H組大鼠:HIRI+BER組大鼠肝細(xì)胞水腫及變性壞死程度較HIRI組好轉(zhuǎn)。