CHAC2通過非折疊蛋白反應調控胃腸腫瘤細胞的凋亡和自噬.pdf

1、在我國,消化系統(tǒng)癌癥死亡率始終排名靠前,其中胃癌和腸癌均位于前五位。腫瘤的發(fā)生發(fā)展是多階段、多步驟的,由多種因素(內源性和外源性)異常累積并相互作用,尤其涉及抑癌基因的失活和原癌基因的激活。因此,探索新的腫瘤抑癌基因功能、明確其與胃腸道腫瘤惡性特征的關系,對揭示腫瘤起源及進展的微觀分子機制、指導臨床早期診斷和個體化治療具有重要意義。
　　目的:CHAC2是離子轉運調節(jié)類似蛋白(Cation transport regulator-

2、like protein,CHAC)家族的成員,我們發(fā)現(xiàn)它在胃腸道腫瘤組織及多數(shù)胃腸腫瘤細胞株中表達量降低。希望更深入地探索CHAC2的生物學功能,闡明其作用于胃腸道腫瘤發(fā)生發(fā)展過程的機制。
　　方法:用RT-PCR,免疫組織化學,Western Blot技術檢測CHAC2在正常人組織和胃腸腫瘤組織及胃腸癌腫瘤細胞系的表達。通過體外質粒轉染,建立穩(wěn)定表達CHAC2的胃癌和結直腸癌細胞株進行生物學功能實驗,觀察CHAC2在體外對細胞

3、表型的影響。實驗包括細胞增殖、遷移侵襲實驗,流式細胞術測細胞周期、鈣離子濃度、活性氧水平、凋亡,細胞內總谷胱甘肽含量測定等。還通過Western Blot檢測相關通路蛋白的變化,研究CHAC2可能的調控機制,重點觀測細胞凋亡和自噬情況。還通過異體種植腫瘤模型進一步觀察CHAC2在體內對腫瘤生長及轉移的影響。
　　結果:CHAC2在所有檢測的胃腸腫瘤細胞系中蛋白表達量明顯降低。免疫組化結果顯示:與正常胃腸粘膜組織相比,CHAC2蛋白

4、表達水平在大多數(shù)胃腸腫瘤組織中顯著下降,且與胃癌和結直腸癌的分期、區(qū)域淋巴結轉移和總生存期等顯著相關。CHAC2高表達患者的3年存活率明顯比低表達的患者高(胃癌P＜0.001,結直腸癌P=0.001)。相較于對照組,CHAC2轉染株細胞在體內、外的生長、增殖和遷移能力都受到抑制。流式細胞術和Western Blot結果顯示CHAC2可以促進凋亡和自噬,提升細胞內鈣離子濃度和活性氧水平,并損耗谷胱甘肽,參與到非折疊蛋白反應中。