穿心蓮內酯逆轉腸癌5-FU耐藥及其分子機制研究.pdf

1、目的：
　　5-氟尿嘧啶（5-FU）在結直腸癌一線化療方案中一直處于基石的地位，然而隨著應用時間的延長，其療效往往受到腫瘤耐藥以及相關毒副反應的限制。穿心蓮內酯（Andrographolide）是爵床科植物穿心蓮中的二萜內酯類化合物，眾多研究表明其具有抗菌、抗病毒、抗炎等藥理作用。在本研究中，我們探索了穿心蓮內酯與5-FU聯(lián)用逆轉腸癌耐藥及其潛在的分子機制。
　　方法:
　　我們利用MTT和細胞凋亡檢測技術來檢測穿心蓮

2、內酯聯(lián)合5-FU對耐藥細胞的抑制效果;除此之外，我們還在HCT116/5-FUR耐藥細胞裸鼠移植瘤模型上觀察了聯(lián)用的效果;利用免疫印跡和免疫組化技術探討在經過穿心蓮內酯和/或5-FU處理后的細胞和腫瘤組織中BAX蛋白的表達情況;利用藥物蛋白結合實驗驗證穿心蓮內酯與BAX蛋白的直接結合能力;利用免疫組化技術檢測人腸癌樣本中BAX蛋白的表達水平并分析其與疾病無進展生存期(PFS)之間的關系。
　　結果:
　　1、MTT和凋亡檢測

3、結果顯示穿心蓮內酯可以部分逆轉耐藥細胞對5-FU的耐藥性。
　　2、小鼠移植瘤模型顯示，穿心蓮內酯聯(lián)合5-FU明顯抑制小鼠耐藥腫瘤的生長，單用5-FU及穿心蓮內酯抑制效果不明顯。
　　3、穿心蓮內酯聯(lián)用5-FU明顯上調BAX蛋白的表達水平，體外細胞水平研究證實，穿心蓮內酯逆轉腸癌5-FU耐藥依賴于上調BAX蛋白的表達，其上調機制的與作用于蛋白翻譯后途徑有關。
　　4、利用生物素蛋白垂釣及胞內熱遷移實驗，我們發(fā)現(xiàn)穿心蓮內

4、酯直接靶向結合于BAX蛋白。
　　5、通過檢測分析人腸癌組織標本發(fā)現(xiàn)，腸癌組織中BAX蛋白的表達水平與含5-FU的化療方案化療后的PFS有一定的正相關性。
　　結論:
　　該研究闡明了腸癌細胞對5-FU耐藥的機制，并發(fā)現(xiàn)穿心蓮內酯在一定程度上可以恢復耐藥細胞對5-FU的敏感性，機制為穿心蓮內酯直接靶向結合于BAX蛋白，并通過作用蛋白翻譯后途徑上調BAX的表達，最終促進5-FU誘導的線粒體介導的細胞凋亡?？傊撗芯繛榕R