穿心蓮種質(zhì)資源及其質(zhì)量評價研究.pdf

1、穿心蓮是一具有國際代表性的重要藥用植物，在中國、印度、馬來西亞等國家具有悠久的民間藥用史，用于防治上呼吸道感染、胃腸及肝膽疾病，且被廣泛、大量地應(yīng)用于國內(nèi)外制藥行業(yè)。穿心蓮是廣東省特色中藥材之一，以穿心蓮為主要組成藥物的消炎利膽片即是廣東省名優(yōu)產(chǎn)品。近年來，關(guān)于穿心蓮內(nèi)酯類成分治療肺炎、肝炎、結(jié)腸癌、呼吸道感染、糖尿病和艾滋病等藥理研究報導(dǎo)越來越多，穿心蓮藥材在國內(nèi)外的需求量與日俱增，迫切需要優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)穩(wěn)定的藥材供應(yīng)。為保證穿心蓮藥用植物

2、資源的可持續(xù)發(fā)展和利用，有必要對目前我國穿心蓮藥用植物資源進(jìn)行詳細(xì)調(diào)查，并對其進(jìn)行種質(zhì)資源研究和質(zhì)量評價，探索穿心蓮優(yōu)良種質(zhì)培育途徑，完善穿心蓮種質(zhì)資源質(zhì)量評價方法;另一方面，是將傳統(tǒng)種質(zhì)資源研究方法與現(xiàn)代科學(xué)研究相結(jié)合的有益嘗試，為高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)穿心蓮的培育和中藥資源的開發(fā)利用研究提供了一些新的想法和思路。
　　主要研究內(nèi)容概述如下:
　　一、穿心蓮種質(zhì)資源調(diào)查研究
　　（一）穿心蓮種質(zhì)資源分布、生物學(xué)特性及產(chǎn)銷情況調(diào)查<

3、br>　　對廣東、福建、廣西、四川及云南的穿心蓮種質(zhì)資源進(jìn)行了生物學(xué)特性、資源蘊藏量及產(chǎn)銷情況等多方面的調(diào)查，并收集了大量樣品。在實地調(diào)查中發(fā)現(xiàn)目前僅在云南文山、福建泉州有極少野生資源分布，多為單株生長于人跡罕至的森林中，但由于氣候以及人為因素，已近乎滅絕，此外便是零星分布的半野生穿心蓮。目前栽培穿心蓮主要分布在廣東省湛江市和清遠(yuǎn)市、福建省漳州市、廣西省貴港市和南寧市、四川省宜賓市，穿心蓮在這四省的栽培面積分別約為5000畝、4000畝

4、、6萬畝、2000畝，以廣西省種植面積最大，而且廣西有專門的種子田，四川和廣東所用穿心蓮種子均來源于廣西，而云南自2010年后已無種植。栽培穿心蓮多采用單作或套種，采收加工方法隨意，多是當(dāng)?shù)厮幧袒蛩幤笾苯邮召彺┬纳徃稍锏厣喜糠只蛉~、莖、根部位，收購價2～8元。不同產(chǎn)地的穿心蓮其形態(tài)特征存在較大差別，葉片大小、花徑大小、株高等是主要的形態(tài)多樣性指標(biāo)。
　?。ǘ┐┬纳彿N質(zhì)資源數(shù)據(jù)庫信息系統(tǒng)構(gòu)建
　　以“西南野生生物種質(zhì)資源庫”

5、和“南藥種質(zhì)資源數(shù)據(jù)庫”為參考，建立了穿心蓮種質(zhì)資源數(shù)據(jù)庫信息系統(tǒng)，在Windows環(huán)境下構(gòu)建數(shù)據(jù)管理平臺，詳細(xì)載入了穿心蓮的資源分布、蘊藏量、生境、生物學(xué)特性，以及不同產(chǎn)地穿心蓮種質(zhì)資源原植物、標(biāo)本及其化學(xué)指紋圖譜等圖片信息，從而利于穿心蓮種質(zhì)資源信息的實時更新以及資源保護(hù)。
　　二、穿心蓮種質(zhì)資源遺傳多樣性研究
　?。ㄒ唬┗?種同工酶的穿心蓮種質(zhì)資源遺傳多樣性研究
　　采用過氧化物酶、超氧化物歧化酶、多酚氧化酶、

6、細(xì)胞色素氧化酶、酯酶、過氧化氫酶電泳技術(shù)，對3份野生穿心蓮種質(zhì)資源和27份栽培穿心蓮的遺傳多樣性進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，6種同工酶共檢測到24條穩(wěn)定酶帶，其中1條為特異酶帶，出現(xiàn)在福建省泉州野生穿心蓮多酚氧化酶酶譜中。上述6種同工酶的多肽位點百分率分別為75.00％、40.00％、57.14％、0.00％、33.33％和66.66％。30份穿心蓮材料間的相似系數(shù)介于0.708～1.000，平均值為0.863，遺傳距離介于0.000～0.19

7、7，平均遺傳距離為0.087，福建泉州野生穿心蓮與栽培品種間的相似系數(shù)相對較小，遺傳距離較大，其它穿心蓮種質(zhì)資源間的相似系數(shù)較大，遺傳距離較小。聚類分析表明在相似系數(shù)為0.795處可將30份穿心蓮材料聚為3類，第Ⅰ類由福建泉州野生穿心蓮組成;第Ⅱ類由廣東湛江市遂溪縣栽培穿心蓮組成;剩余的23份穿心蓮材料聚為第Ⅲ類，其在相似系數(shù)為0.848處聚為3個亞類。主成分分析將30份穿心蓮材料分成10個彼此孤立的成分，且其分布位置較近。結(jié)果表明30

8、份不同產(chǎn)地穿心蓮種質(zhì)資源的遺傳多樣性水平極低，其中福建泉州野生穿心蓮與栽培穿心蓮間的親緣關(guān)系相對較遠(yuǎn)。
　　（二）穿心蓮葉綠體基因組序列測定及主要基因片段的比較分析
　　通過雙向延伸葉綠體的兩個保守基因獲得葉綠體基因組骨架序列再對其堿基進(jìn)行校正以獲得最終序列的方法獲得穿心蓮葉綠體基因組序列，為爵床科第一條葉綠體基因組序列。穿心蓮的葉綠體基因組全長150249 bp，含38.3％ GC，呈典型四段式結(jié)構(gòu)，編碼132個基因，去除

9、重復(fù)后為114個，包括80個蛋白編碼、30個tRNA和4個rRNA基因，在穿心蓮葉綠體蛋白編碼基因中matK基因的序列變異最大。在穿心蓮的葉綠體基因組中共檢測到4對正向、5對反向、7條串聯(lián)重復(fù)序列和154個SSR位點?；?3個物種的簡單重復(fù)序列(SSR)分析發(fā)現(xiàn)這些物種的SSR絕大多數(shù)為連續(xù)A或連續(xù)T，在葉綠體基因組內(nèi)呈不均一分布。比較基因組研究表明穿心蓮與其它三個唇形目物種的葉綠體基因組之間整體相似性較好，基因間區(qū)的變異最大。序列變

10、異分析發(fā)現(xiàn)了菊分支10個變異最大的基因和10個最保守的基因，其中matK是平均遺傳距離最大的基因，可以作為穿心蓮最好的遺傳標(biāo)記。經(jīng)比較，不同產(chǎn)地穿心蓮的葉綠體基因序列間沒有差別，這從葉綠體基因角度說明不同產(chǎn)地穿心蓮種質(zhì)資源的遺傳多樣性水平較低?；?3個葉綠體蛋白編碼基因的系統(tǒng)進(jìn)化研究表明穿心蓮在現(xiàn)有葉綠體基因組公布的菊分支物種中與丹參關(guān)系最近。
　　三、環(huán)境因子對穿心蓮生物學(xué)特性影響的研究
　?。ㄒ唬┩寥览砘再|(zhì)對穿心蓮質(zhì)

11、量性狀的影響
　　對穿心蓮不同產(chǎn)地的土壤因子進(jìn)行深入研究，發(fā)現(xiàn)中性偏弱酸性土壤較為適宜穿心蓮的生長，而土壤質(zhì)地以紅壤為好。同時對不同產(chǎn)地間土壤中所含大量元素對穿心蓮質(zhì)量性狀的影響進(jìn)行研究，通過相關(guān)性分析和通徑分析可以看出土壤理化性質(zhì)對穿心蓮質(zhì)量性狀影響較大，土壤pH及所含的氮、磷、鉀、有機(jī)質(zhì)等與穿心蓮中所含總內(nèi)酯、總黃酮、醇溶性浸出物含量均有一定的相關(guān)性。其中速效磷是直接影響穿心蓮總內(nèi)酯含量的重要元素，提示適當(dāng)增施磷肥，可以提高穿

12、心蓮的質(zhì)量。同時由于有機(jī)質(zhì)與總黃酮也有極顯著正相關(guān)，且其對總黃酮的間接作用最大，表明在穿心蓮種植中可以通過實施有機(jī)肥影響土壤中其它成分的含量以提高穿心蓮質(zhì)量，為穿心蓮規(guī)范化種植提供了參考。
　?。ǘ┓柿蠈Υ┬纳徤L、同工酶及藥效成分含量的影響
　　采用單因子隨機(jī)設(shè)計將盆栽植株分為空白、有機(jī)肥、化肥、微肥4個處理組，根據(jù)文獻(xiàn)報道對營養(yǎng)生長期的穿心蓮進(jìn)行根部施肥，至花期采收，測定植株株高、分枝數(shù)、葉片數(shù)、單株鮮重等生長參數(shù)，對

13、不同肥料處理后穿心蓮葉、莖、根中的過氧化物酶、酯酶同工酶進(jìn)行電泳分析，并測定不同肥料組穿心蓮葉中穿心蓮內(nèi)酯類成分的含量。結(jié)果顯示有機(jī)肥組的穿心蓮植株鮮重和干重最大，微肥次之;施肥后穿心蓮過氧化物酶和酯酶同工酶酶活性較空白增高，且化肥組穿心蓮根部過氧化物酶和葉中酯酶活性最高;施肥后穿心蓮葉中有效成分含量增高，微肥組穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯的含量增高最多，為39％，化肥和有機(jī)肥組分別為26％、15％，而化肥組穿心蓮中脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量升高最多，

14、為85％，有機(jī)肥和微肥組分別為82％、39％。研究結(jié)果說明有機(jī)肥對穿心蓮的生長性狀影響較大且有利于脫水穿心蓮內(nèi)酯的生成，微肥有利于穿心蓮內(nèi)酯的積累，肥料的施用可以加強穿心蓮的生理生化水平，因此可以通過配施有機(jī)肥和微肥提高穿心蓮的產(chǎn)量和質(zhì)量，同時達(dá)到環(huán)保效果。
　　（三）不同生長期穿心蓮葉中6種同工酶的變化
　　通過對不同生長期穿心蓮葉中過氧化物酶、超氧化物歧化酶、多酚氧化酶、細(xì)胞色素氧化酶、過氧化氫酶、酯酶6種同工酶酶譜進(jìn)行

15、電泳測定，分析其在不同生長期的變化規(guī)律。結(jié)果表明穿心蓮葉中的上述6種同工酶均有各自的特征酶帶，酶活性均在花果期明顯增高，其中過氧化物酶和多酚氧化酶還產(chǎn)生了新的酶帶，說明花果期穿心蓮植株保護(hù)酶活性的升高與其生理作用水平的提高協(xié)調(diào)一致，而酶活性的增高和特征酶帶的產(chǎn)生有利于調(diào)節(jié)其對環(huán)境適應(yīng)性的代謝過程，從而順利度過生長轉(zhuǎn)型期，同時保護(hù)植株免受有害物質(zhì)損傷，從而使細(xì)胞內(nèi)具備大量剩余能量進(jìn)行次生代謝產(chǎn)物的積累。
　?。ㄋ模}脅迫對穿心蓮生長

16、、生理及次生代謝產(chǎn)物的影響
　　通過設(shè)置空白和四個鹽度4 dSm-1、8 dSm-1、12 dSm-1、16 dSm-1處理組，對長勢一致的穿心蓮幼苗處理15天后，分析不同鹽濃度條件下穿心蓮的生長、同工酶及代謝產(chǎn)物變化情況。結(jié)果顯示12 dSm-1是穿心蓮可以耐受的鹽度閾值;隨著鹽濃度的增加，穿心蓮的生長會受到抑制，過高時植株會出現(xiàn)葉片卷曲、枯萎甚至脫落的現(xiàn)象，但低于鹽閾值時，穿心蓮的生長受限情況不明顯;隨著鹽度的增大，穿心蓮葉和

17、根中的抗氧化酶（過氧化物酶、超氧化物歧化酶、細(xì)胞色素氧化酶、多酚氧化酶、過氧化氫酶）和酯酶酶活性增強，且不同部位同工酶的表現(xiàn)不同;作為評價作物細(xì)胞膜受損程度的丙二醛含量逐漸增高，但當(dāng)鹽濃度過高時，緩解細(xì)胞受損的脯氨酸含量會急劇升高以保護(hù)植株生長;在閾值范圍內(nèi)，穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯及去氧穿心蓮內(nèi)酯的含量隨著鹽度的增加而增多。說明穿心蓮具有一定耐鹽性，且適當(dāng)?shù)柠}處理有利于穿心蓮內(nèi)酯類化學(xué)成分的積累，可以培育具有抗鹽性且有效成分含量高的

18、穿心蓮種質(zhì)。此外，穿心蓮可以作為一種耐鹽作物在鹽堿地中進(jìn)行推廣種植，擴(kuò)大穿心蓮種質(zhì)資源分布面積的同時有效利用土地資源。在鹽脅迫環(huán)境中，穿心蓮會通過自我調(diào)節(jié)不同部位酶活性、生成代謝產(chǎn)物等來適應(yīng)逆境;當(dāng)脅迫損害加強時，為了達(dá)到物質(zhì)和能量的恒定狀態(tài)，穿心蓮會通過提高酶活性、脯氨酸含量及次生代謝產(chǎn)物含量來維持植株正常生長，但次生代謝產(chǎn)物的生成是一個能量大量損失的過程，因此當(dāng)鹽脅迫導(dǎo)致的氧化應(yīng)激危害進(jìn)一步加強時，穿心蓮開始減少次生代謝產(chǎn)物的生成，

19、轉(zhuǎn)而大量生成具有保護(hù)性的小分子物質(zhì)脯氨酸，從而減輕細(xì)胞膜的受損程度。
　?。ㄎ澹┨鸩藟A對穿心蓮鹽脅迫損傷的緩解作用
　　為了緩解高濃度鹽處理時穿心蓮的生長抑制現(xiàn)象，將5mM甘氨酸甜菜堿加入到鹽溶液中再對穿心蓮進(jìn)行處理，至花期采收樣品，測定生長參數(shù)、穿心蓮葉、莖、根中的抗氧化酶活性，以及葉和莖中穿心蓮內(nèi)酯的含量。結(jié)果顯示甜菜堿可以緩解鹽脅迫所導(dǎo)致的氧化應(yīng)激損害，鹽度超過閾值時穿心蓮未出現(xiàn)葉片卷曲、掉落現(xiàn)象，抗氧化酶活性保持一致

20、，葉和莖中穿心蓮內(nèi)酯的含量隨著鹽度的增高而升高，而且延長鹽處理時間后也未出現(xiàn)不良情況。因此，外源甜菜堿可以很好地緩解鹽脅迫對穿心蓮的生長抑制作用，同時保證關(guān)鍵藥效成分穿心蓮內(nèi)酯的含量提高。
　　（六）水分脅迫對穿心蓮生長、同工酶及主要藥效成分的影響
　　采用盆栽試驗，單因素隨機(jī)設(shè)計法設(shè)置土壤相對含水量100％、40％、20％三個組，100％為對照，于營養(yǎng)生長期進(jìn)行水分脅迫，待其長至花期采收樣品，測定生長參數(shù)，穿心蓮葉、莖、根

21、過氧化物酶(POD)和酯酶(EST)同工酶以及葉中穿心蓮內(nèi)酯類成分的含量。結(jié)果表明水分脅迫下穿心蓮生長相對緩慢，葉片內(nèi)的POD酶活性和莖中的EST酶活性明顯降低，根內(nèi)POD和EST酶活性幾乎無變化;40％水分脅迫時葉中穿心蓮內(nèi)酯的含量較100％升高了30％，脅迫加重時含量下降，而脫水穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯和去氧穿心蓮內(nèi)酯在水分脅迫條件下含量均明顯下降。說明穿心蓮在水分脅迫下會消耗大量能量維持正常生長，生理酶活性降低，藥效成分生物合成能

22、力減弱;40％水分脅迫時穿心蓮內(nèi)酯含量的升高可能是抵御環(huán)境脅迫的應(yīng)激反應(yīng)表現(xiàn)。因此穿心蓮的耐旱性較弱，濕潤環(huán)境有利于優(yōu)質(zhì)穿心蓮種質(zhì)資源的培育和生產(chǎn)。
　　四、穿心蓮種質(zhì)資源的質(zhì)量評價
　?。ㄒ唬┐┬纳彿N質(zhì)資源的高效薄層色譜研究
　　研究穿心蓮高效薄層色譜測定分析方法，對包括14批不同產(chǎn)地穿心蓮種質(zhì)、14批商品藥材、不同部位以及不同干燥品進(jìn)行了HPTLC指紋圖譜研究，以硅膠GF254高效預(yù)制薄層板，以氯仿-甲苯-甲醇(8

23、0∶10∶15)為展開劑，5％硫酸乙醇溶液顯色后，獲得穿心蓮二萜內(nèi)酯類化學(xué)成分的薄層熒光色譜指紋圖譜，經(jīng)指紋圖譜系統(tǒng)解決方案軟件(CHROMA1.5)生成共有模式。穿心蓮二萜內(nèi)酯類化學(xué)成分的薄層色譜圖由12個特征熒光斑點組成，HPTLC指紋圖譜共有模式含有9個特征峰，相似度分析表明不同商品藥材的相似度存在較大差異。對比葉、莖、根的模式圖，發(fā)現(xiàn)商品藥材與莖的吻合度最高。HPTLC色譜圖不能較好地顯示不同穿心蓮種質(zhì)資源間的差異。以鮮品為對照

24、，利用HPTLC方法考察不同干燥方法(包括陰干、曬干、烘干(60℃)、凍干、微波干燥）對穿心蓮葉中穿心蓮內(nèi)酯類化學(xué)成分的影響，結(jié)果表明干燥后的穿心蓮葉中含有的成分種類和數(shù)量均較鮮品多。
　　以氯仿-甲苯-甲醇(70∶10∶15)為展開劑，10％三氯化銻氯仿溶液顯色后，獲得穿心蓮根中黃酮類化學(xué)成分的薄層色譜直觀圖譜，由7個鮮亮的黃色斑點組成（日光下），方法重復(fù)性良好，可為后期穿心蓮黃酮類化學(xué)成分的相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。因此，利用HPTL

25、C可以對穿心蓮進(jìn)行質(zhì)量評價，快速有效區(qū)分穿心蓮不同質(zhì)量級藥材。
　　（二）穿心蓮種質(zhì)資源的高效液相色譜研究
　　1.穿心蓮內(nèi)酯類化學(xué)成分的HPLC指紋圖譜研究
　　對30個不同產(chǎn)地的穿心蓮種質(zhì)進(jìn)行高效液相色譜指紋圖譜研究，并以廣東省湛江市遂溪縣城月鎮(zhèn)的栽培穿心蓮為標(biāo)準(zhǔn)藥材，選取穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯四個色譜峰進(jìn)行多點校正，建立了更具代表性、更加豐富的指紋圖譜共有模式圖，含有20個共有峰

26、，分離度良好，重現(xiàn)性佳。相似度分析結(jié)果顯示，不同產(chǎn)地穿心蓮種質(zhì)與對照穿心蓮間的相似系數(shù)介于0.331～0.995，變化范圍較大，說明不同產(chǎn)地穿心蓮種質(zhì)資源間存在明顯的化學(xué)成分表型多樣性。該HPLC方法可以很好地對不同種質(zhì)穿心蓮進(jìn)行質(zhì)量評價。
　　2.穿心蓮內(nèi)酯等4種主要成分的含量測定
　　以穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯和去氧穿心蓮內(nèi)酯作為含量測定指標(biāo)，分別對不同產(chǎn)地穿心蓮種質(zhì)資源葉、莖中所含上述四個成分的含量進(jìn)行

27、測定比較。結(jié)果顯示不同產(chǎn)地穿心蓮葉、莖中含量差別迥異，且葉中的含量差異程度較莖中顯著，說明不同產(chǎn)地穿心蓮的質(zhì)量差異主要表現(xiàn)在葉部位。經(jīng)比較廣東產(chǎn)穿心蓮所含穿心蓮內(nèi)酯類成分含量最高，穿心蓮內(nèi)酯含量高達(dá)54.7 mg·g-1，總內(nèi)酯高達(dá)82.7mg·g-1，因此廣東穿心蓮種質(zhì)資源質(zhì)量最佳，同時說明可在廣東進(jìn)行穿心蓮規(guī)范化種植推廣。光照充足時穿心蓮總內(nèi)酯在葉中含量較高，而完全背陰時穿心蓮總內(nèi)酯在莖中含量較高，說明光照是影響穿心蓮種質(zhì)質(zhì)量的關(guān)鍵

28、因素之一，是穿心蓮化學(xué)表型多樣性形成的主要因素。
　　分別于一天內(nèi)8:00，11:00，14:00，17:00，20:00采集同一植株的葉片，測定四個成分的含量變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)穿心蓮內(nèi)酯等成分的含量在8:00至17:00這段時間內(nèi)有升降波動，在17:00到20:00時持續(xù)升高，說明光照有利于穿心蓮內(nèi)酯等藥效成分的生物合成。
　　3.溶媒對穿心蓮內(nèi)酯類化學(xué)成分穩(wěn)定性的影響
　　利用HPLC法檢測不同溶媒提取液在放置過程中5

29、個主要成分的含量變化，探討溶媒對其化學(xué)穩(wěn)定性的影響。結(jié)果顯示甲醇、乙醇及其醇水混合溶媒對5個化學(xué)成分的提取率較高，但是隨著溶媒極性的增大其化學(xué)穩(wěn)定性降低;常溫條件下，以甲醇為溶媒，穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯和去氧穿心蓮內(nèi)酯在放置過程中含量會升高，但3天后開始下降，在HPLC圖譜中顯示峰較明顯的X1和X2成分則一直下降;在甲醇水溶液中，五個指標(biāo)成分的含量一直下降;在乙醇、85％EtOH中，五個指標(biāo)成分3天內(nèi)均較穩(wěn)定。85％乙醇提取液高溫處

30、理后，穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量均升高，2h后僅脫水穿心蓮內(nèi)酯仍升高，而X1和X2一直減少;低溫放置過程中，各成分基本保持不變。85％乙醇為實現(xiàn)穿心蓮內(nèi)酯類成分較高提取率、穩(wěn)定、環(huán)保的最佳溶媒;放置過程中，穿心蓮內(nèi)酯的含量下降并不是轉(zhuǎn)化為脫水穿心蓮導(dǎo)致的，還有其它成分參與的復(fù)雜轉(zhuǎn)變和轉(zhuǎn)化;穿心蓮內(nèi)酯類成分分析過程中應(yīng)注意溶媒的選擇，且不宜長時間放置;生產(chǎn)過程中應(yīng)該對其環(huán)境溫度進(jìn)行隨時監(jiān)測，盡量控制在低溫狀態(tài)下。

31、>　?。ㄈ┎煌a(chǎn)地穿心蓮中重金屬及農(nóng)殘檢測
　　1.電感耦合等離子體質(zhì)譜法同時測定不同產(chǎn)地穿心蓮藥材中19種金屬元素含量
　　建立應(yīng)用電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)測定穿心蓮藥材中19種微量元素（包括鈉、鎂、鋁、硅、鉀、鈦、鉻、錳、鐵、鈷、鎳、銅、鋅、砷、銀、鎘、錫、汞、鉛）含量的測定方法。樣品經(jīng)微波消化后直接采用八極桿碰撞/反應(yīng)池技術(shù)結(jié)合電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)進(jìn)行測定。結(jié)果顯示測定方法中所有元素的

32、線性相關(guān)系數(shù)(r)都大于0.9990，檢出限在0.001～0.051μ g·kg-1之間，重復(fù)性和穩(wěn)定性的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)都小于10％，藥材的加標(biāo)回收率在88.64％～102.98％之間，符合痕量分析的要求。本方法檢出限低、操作簡單、快速，且靈敏度高，可作為穿心蓮藥材中微量元素的定量分析。
　　2.氣相色譜-電子捕獲檢測器(GC-63Ni-ECD)法測定穿心蓮藥材中22種農(nóng)藥殘留
　　采用GC-ECD法建立藥材中16種

33、有機(jī)氯和6種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量的同時測定方法。用弗羅里硅土萃取凈化樣品后，GC-ECD測定，ZB-1701P彈性石英毛細(xì)管柱程序升溫分離，載氣為高純N2，柱流量1.45 mL·min-1，不分流進(jìn)樣1μL。弗羅里硅土固相萃取能有效凈化藥材樣品中雜質(zhì)，檢測限為0.1～3.0μ g·kg-1，平均回收率為82.31～120.01％(RSD0.68～3.41％，n=6)。所建立的方法能同時測定藥材中22種有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量，方