穿心蓮活性成分提制分析及其與生物大分子作用機理研究.pdf

1、本文以穿心蓮為研究對象，以現(xiàn)代新興樣品前處理技術(shù)為手段，從穿心蓮中提取以內(nèi)酯類和黃酮類為代表的活性成分，系統(tǒng)研究了諸因素對提取率的影響，以確定活性成分最優(yōu)提取條件。同時建立了穿心蓮藥材指紋圖譜質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，并對穿心蓮黃酮類代表物質(zhì)蘆丁與DNA的相互作用機理進行了相關(guān)研究，以期為新藥開發(fā)提供理論依據(jù)。具體內(nèi)容如下： 1.穿心蓮中總黃酮的提制分析 采用不同提取溶劑、提取方法、提取條件探索穿心蓮總黃酮的最優(yōu)提取工藝。結(jié)果表明：

2、與常規(guī)提取方法相比，微波輔助提取法省時、溶劑耗費少、其總黃酮提取效率最高。通過正交試驗對微波提取條件進行了優(yōu)化，得到最佳提取條件為：用60％乙醇在固液比為1:15 g/mL的條件下提取6 min。研究采用NaNO2-AI(NO3)3-NaOH-黃酮體系顯色，并用紫外可見分光光度法檢測，線性回歸方程為A=4.975 C+0.1162，相關(guān)系數(shù)r=0.9997，線性范圍為0.0017-0.0800mg/mL，總黃酮平均回收率為103.14％

3、，RSD=3.66％(n=5)，方法學(xué)考察結(jié)果證明其精密度及重現(xiàn)性良好。用所擬方法對不同產(chǎn)地的穿心蓮生藥材及不同廠家的穿心蓮中成藥進行了檢測，結(jié)果表明：因產(chǎn)地相近，穿心蓮生藥材中總黃酮含量差異不大；但不同廠家生產(chǎn)的穿心蓮中成藥中總黃酮含量存在顯著差異，因此需對穿心蓮中成藥進行質(zhì)量控制以期達到其最大療效。 2.穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯的提制分析 將酶提取、微波輔助提取等新技術(shù)應(yīng)用于穿心蓮活性成分穿心蓮內(nèi)酯的提取，比較了微波輔助提

4、取法、回流提取法、堿水提取法、超聲提取法、室溫冷浸提取法，發(fā)現(xiàn)微波輔助提取法提取效率相對較高。進一步研究發(fā)現(xiàn)將酶預(yù)處理技術(shù)應(yīng)用于微波輔助提取方法后，其穿心蓮內(nèi)酯提取效率比單純的微波輔助提取法更高。將單因素實驗與正交試驗相結(jié)合探索最佳提取條件。實驗結(jié)果表明：在pH值為5.5，溫度為40℃條件下，用1.5mL/g的纖維素酶水解1h，后用70％乙醇在固液比為1:15 g/mL的條件下微波提取4min的提取效率最高。用反相高效液相色譜法測定穿心

5、蓮內(nèi)酯的含量，其最佳色譜條件為：柱溫25℃，流動相(經(jīng)過脫氣)為V(甲醇):V(水)=70:30，流速0.8 mL/min，進樣量為10μL，線性回歸方程為：Y=2.06624x108X-141773， r=0.9998，線性范圍為0.0007-0.0076 mg，穿心蓮內(nèi)酯平均回收率為102.83％，RSD為1.15％(n=6)，方法學(xué)考察結(jié)果證明其精密度及重現(xiàn)性良好。用所擬方法對不同產(chǎn)地的穿心蓮生藥材及不同廠家的穿心蓮中成藥進行了檢

6、測，結(jié)果表明：因產(chǎn)地相近，穿心蓮生藥材中穿心蓮內(nèi)酯含量差異不大；但不同廠家生產(chǎn)的穿心蓮中成藥中穿心蓮內(nèi)酯含量存在顯著差異，因此需對穿心蓮中成藥進行質(zhì)量控制以期達到其最大療效。 3.穿心蓮二維指紋圖譜的創(chuàng)建 研究采用微波輔助提取法提取穿心蓮活性成分，高效液相色譜-二極管陣列檢測器( HPLC-DAD)對提取液在全波長掃描下進行檢測，創(chuàng)建了包含色譜及光譜信息的穿心蓮二維指紋圖譜。同時結(jié)合相似度評價系統(tǒng)及聚類分析方法對穿心蓮樣

7、品進行分析。結(jié)果表明采收期為8月和9月份的穿心蓮指紋圖譜與穿心蓮共有模式相似度高。比較不同藥用部位的穿心蓮指紋圖譜相似度，得到穿心蓮葉與共有模式的相似度更高。最后比較不同產(chǎn)地穿心蓮藥材相似度，發(fā)現(xiàn)藥材可根據(jù)相似度分為A、B兩組，而A組均采自南方B組均采自北方，說明產(chǎn)地是影響穿心蓮質(zhì)量的重要因素。進行聚類分析發(fā)現(xiàn)根據(jù)歐氏距離的大小可將穿心蓮生藥材聚為兩類，其產(chǎn)地分別為南方和北方，與相似度分析結(jié)果相同。同時對市售藥材進行相似度分析及聚類分析

8、發(fā)現(xiàn)有兩種藥材相似度較低，而聚類分析中它們與對照指紋圖譜也難聚為一類，所以認為它們質(zhì)量較差。建立的穿心蓮二維指紋圖譜可應(yīng)用于穿心蓮藥材的質(zhì)量監(jiān)控。 4.DNA與穿心蓮活性小分子蘆丁相互作用機理研究 研究采用循環(huán)伏安法及紫外-可見分光光度法探測穿心蓮中黃酮類活性成分蘆丁與DNA相互作用機理。循環(huán)伏安法研究發(fā)現(xiàn)：引入DNA后，蘆丁峰電流降低，峰電位正移，根據(jù)Bao X.Y理論推斷蘆丁與DNA在該條件下結(jié)合生成了一種非電活性的