穿心蓮內(nèi)酯對(duì)ANIT誘導(dǎo)的大鼠肝損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、膽汁淤積是由膽汁生成障礙或/和膽汁流動(dòng)障礙所致的一組疾病共同的臨床癥狀，常見的病因包括膽道結(jié)石、肝膽惡性腫瘤、妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積、進(jìn)行性家族遺傳性肝內(nèi)膽汁淤積癥等。由于膽汁排出障礙，導(dǎo)致大量膽汁成分蓄積在肝細(xì)胞中，引起肝細(xì)胞氧化應(yīng)激、炎癥、凋亡和纖維化，如不進(jìn)行有效干預(yù)，最終將演化為肝硬化。熊去氧膽酸是目前治療膽汁淤積的唯一有效藥物，但是對(duì)于原發(fā)性硬化性膽管炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化等特殊病例，仍缺乏有效的治療手段。因此，急需開發(fā)一種高效低

2、毒的膽汁淤積性肝疾病的有效藥物。
　　穿心蓮內(nèi)酯是中藥穿心蓮的主要活性成分，具有抗菌、消炎、抗腫瘤、抗血小板聚集、抗心肌缺血、保護(hù)心腦血管、降血糖、免疫調(diào)節(jié)、保肝利膽等多種藥理活性。臨床上，相關(guān)制劑用于流行性感冒和腫瘤等疾病的治療，在中國以及亞洲國家應(yīng)用廣泛。近年來，研究發(fā)現(xiàn)穿心蓮內(nèi)酯類化合物對(duì)化學(xué)毒劑和藥物誘導(dǎo)的肝毒性具有顯著的保護(hù)作用。但是，穿心蓮內(nèi)酯對(duì)ANIT誘導(dǎo)的大鼠膽汁淤積和肝損傷的作用及其相關(guān)機(jī)制尚未得到充分研究。

3、r>　　第一部分：穿心蓮內(nèi)酯對(duì)ANIT誘導(dǎo)的大鼠肝損傷和膽汁淤積的保護(hù)作用
　　目的：
　　探討穿心蓮內(nèi)酯對(duì)ANIT誘導(dǎo)的大鼠膽汁淤積和肝損傷的影響。
　　方法：
　　將36只健康成年雄性 SD大鼠（體重180-220 g）隨機(jī)分為以下6組：（1）空白溶劑對(duì)照組；（2）穿心蓮內(nèi)酯正常給藥組（200 mg/kg）；（3）ANIT組（50 mg/kg）；（4）低劑量穿心蓮內(nèi)酯（50 mg/kg）+ANIT組（50 m

4、g/kg）；（5）中劑量穿心蓮內(nèi)酯（100 mg/kg）+ANIT組（50 mg/kg）；（6）高劑量穿心蓮內(nèi)酯（200 mg/kg）+ANIT組（50 mg/kg）。穿心蓮內(nèi)酯混懸于0.5%CMC-Na中，以10 ml/kg體積灌胃給藥，持續(xù)4天，每天上午一次。ANIT溶于食用橄欖油中口服灌胃給藥，于第二天中午給予第3/4/5/6組大鼠50 mg/kg。第1組同時(shí)灌胃給予同容量溶媒。ANIT灌胃后48h，麻醉大鼠并腹主動(dòng)脈取血，分離肝

5、臟組織標(biāo)本。應(yīng)用試劑盒監(jiān)測血清或肝組織中ALT、 AST、 ALP、γ-GGT、總膽汁酸和總膽紅素等肝功、膽汁淤積標(biāo)記物的含量水平。應(yīng)用HE染色評(píng)價(jià)肝組織病理改變。
　　結(jié)果：
　　ANIT誘導(dǎo)大鼠血清中 ALT、 AST、 ALP、γ-GGT、總膽汁酸和總膽紅素等生化指標(biāo)顯著升高，肝臟組織切片呈現(xiàn)病理樣改變。應(yīng)用穿心蓮內(nèi)酯預(yù)處理ANIT誘導(dǎo)的膽汁淤積大鼠，顯著逆轉(zhuǎn)大鼠肝功受損和膽汁淤積程度，肝組織病理改變減輕，表現(xiàn)出劑量依

6、賴的肝保護(hù)作用。
　　結(jié)論：
　　穿心蓮內(nèi)酯對(duì)ANIT所致的大鼠肝損傷具有保護(hù)作用，減輕膽汁淤積程度。
　　第二部分：穿心蓮內(nèi)酯通過抗炎和抗氧化活性逆轉(zhuǎn)ANIT所致大鼠膽汁淤積和肝損傷
　　目的：
　　探討穿心蓮內(nèi)酯逆轉(zhuǎn) ANIT誘導(dǎo)的大鼠膽汁淤積和肝損傷的作用機(jī)制。
　　方法：
　　將36只健康成年雄性 SD大鼠（體重180-220 g）隨機(jī)分為以下6組：（1）空白溶劑對(duì)照組；（2）穿心蓮內(nèi)酯

7、正常給藥組（200 mg/kg）；（3）ANIT組（50 mg/kg）；（4）低劑量穿心蓮內(nèi)酯（50 mg/kg）+ANIT組（50 mg/kg）；（5）中劑量穿心蓮內(nèi)酯（100 mg/kg）+ANIT組（50 mg/kg）；（6）高劑量穿心蓮內(nèi)酯（200 mg/kg）+ANIT組（50 mg/kg）。穿心蓮內(nèi)酯混懸于0.5%CMC-Na中，以10 ml/kg體積灌胃給藥，持續(xù)4天，每天上午一次。ANIT溶于食用橄欖油中口服灌胃給藥，于

8、第二天中午給予第3/4/5/6組大鼠50 mg/kg。第1組同時(shí)灌胃給予同容量溶媒。ANIT灌胃后48h，麻醉大鼠并腹主動(dòng)脈取血，分離肝臟組織標(biāo)本。應(yīng)用試劑盒監(jiān)測血清或肝組織中IL-6、TNF-α、MDA、SOD、GSH和GSH-PX等肝功、炎癥和氧化標(biāo)記物的含量水平。Western blot檢測NF-κB、COX-2、SIRT1和 Nrf2的表達(dá)水平。SIRT1 mRNA表達(dá)水平由real time PCR測定。
　　結(jié)果：

9、r>　　ANIT誘導(dǎo)大鼠血清中IL-6和TNF-α水平升高，NF-κB/COX-2表達(dá)上調(diào)。而且，ANIT升高大鼠血清中MDA水平，SOD、GSH和GSH-PX水平下調(diào)。穿心蓮內(nèi)酯劑量依賴的逆轉(zhuǎn)ANIT所致血清炎癥因子水平上調(diào)和NF-κB/COX-2通路激活，抑制炎癥反應(yīng)。最后，穿心蓮內(nèi)酯劑量依賴的逆轉(zhuǎn) ANIT所致的MDA含量升高、GSH含量下降、以及 SOD和GSH-Px活性下調(diào)，作用機(jī)制可能涉及上調(diào)大鼠肝臟中SIRT1和Nrf2的