表皮形態(tài)發(fā)生素在HIV與HCV共感染肝纖維化中的作用及機(jī)制.pdf

1、目前，在全球公共衛(wèi)生領(lǐng)域，HIV感染與HCV感染都嚴(yán)重威脅人類健康。由于具有相同的傳播途徑，HIV與丙型肝炎病毒(HCV)共感染非常普遍。在AIDS患者中，與HCV的共感染率可達(dá)25％，共感染率隨感染途徑而異，在靜脈藥癮患者中HIV/HCV共感染率約為60％。高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)改變了HIV感染的自然史，使大部分機(jī)會性感染的發(fā)生率明顯下降。HIV感染者生存期明顯延長，對于共感染者來說，HCV引起的肝炎、肝纖維化以及肝硬化已

2、成為影響其發(fā)病和死亡的重要原因之一。目前，HIV/HCV共感染患者肝損傷進(jìn)展的機(jī)制尚未完全明確。
　　人表皮形態(tài)發(fā)生素(Epimorphin, EPM，Syntaxin-2)在正常肝臟主要表達(dá)于肝竇狀隙的肝星狀細(xì)胞（Hepatic stellate cells，HSCs）、匯管區(qū)的膽管與血管細(xì)胞，通過表皮與間質(zhì)之間的相互作用調(diào)控表皮形態(tài)。在肝臟發(fā)育的過程中，HSCs主要通過自身表面特異性表達(dá)的EPM與肝臟干細(xì)胞直接接觸而促進(jìn)肝干細(xì)

3、胞的定向功能性分化。前期，有報道發(fā)現(xiàn)在肝癌、乳腺癌、腸癌等腫瘤性疾病中，EPM也發(fā)揮了重要作用。目前，EPM在HIV/HCV共感染患者中肝纖維化快速進(jìn)展過程中的作用及相關(guān)機(jī)制還不甚明確。
　　目的:
　　考察HIV/HCV共感染后EPM的表達(dá)變化，研究EPM是否能夠影響肝纖維化進(jìn)展以及其相關(guān)分子機(jī)制。
　　方法:
　　1.HIV/HCV對肝星狀細(xì)胞(Hepatic stellate cell，HSC)的影響

4、>　　分別將HSC分為四組（對照組、HIV感染組、HCV感染組、HIV/HCV共感染組），分別通過細(xì)胞周期實驗與Transwell實驗，檢測共感染對HSCs增殖與遷移能力的影響。
　　2.HIV/HCV對肝星狀細(xì)胞基因表達(dá)的影響通過realtime-PCR、wesernblot檢測HIV/HCV共感染對HSC基因表達(dá)影響，相關(guān)基因表達(dá)包括α-SMA、 CollagenⅣ、TGF-β、EPM等。
　　3.EPM表達(dá)變化對HSC

5、的影響通過構(gòu)建過表達(dá)與干涉表達(dá)EPM的肝星狀細(xì)胞，考察EPM對HSCs增殖與遷移的影響以及肝纖維化相關(guān)基因的影響。
　　4.EPM影響肝纖維化進(jìn)展的機(jī)制研究使用Western Blot方法檢測肝纖維化相關(guān)基因的變化，EPM相關(guān)信號通路的變化，以及EPM調(diào)控的功能基因的變化，證明EPM影響肝纖維化進(jìn)展的因素。
　　結(jié)果:
　　1.HIV//HCV共感染促進(jìn)肝星狀細(xì)胞增殖、遷移
　　HSC的增殖與遷移對于肝纖維化及進(jìn)

6、展有重要作用。我們分別將HSC分為四組（對照組、HIV感染組、HCV感染組、HIV/HCV共感染組），通過細(xì)胞周期實驗、MTT實驗以及Transwell實驗發(fā)現(xiàn)HIV/HCV共感染組HSCs的增殖與遷移能力明顯升高。
　　2.HIV/HCV共感染促進(jìn)肝星狀細(xì)胞高表達(dá)EPM、TGF-β、α-SMA、CollagenⅣ的表達(dá)
　　為了檢測共感染后肝星狀細(xì)胞基因表達(dá)的變化，我們通過Q-CPR和WestenBlot實驗證明HIV/H

7、CV共感染能夠影響肝星狀細(xì)胞的多種基因表達(dá)。EPM作為肝內(nèi)肝星狀細(xì)胞特異表達(dá)的蛋白也同時發(fā)生了上調(diào)。
　　3.EPM對于肝星狀細(xì)胞的影響
　　為了研究EPM對于肝星狀細(xì)胞的影響，我們對干涉及過表達(dá)EPM星狀細(xì)胞的增殖與遷移能力進(jìn)行了檢測。EPM沉默之后，肝星狀細(xì)胞的增殖和遷移能力明顯下降。而過表達(dá)EPM后，肝星狀細(xì)胞的增殖和遷移能力明顯上升。因此，肝臟微環(huán)境中星狀細(xì)胞高表達(dá)的EPM能夠促進(jìn)自身的增殖與遷移，從而促進(jìn)肝纖維化的

8、進(jìn)展。
　　4.EPM通過TIMP-1促進(jìn)肝纖維化的進(jìn)展
　　為了進(jìn)一步研究EPM促進(jìn)肝纖維化進(jìn)展的分子機(jī)制，我們檢測了EPM對基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)及其抑制劑家族(TIMPs)表達(dá)的影響。我們發(fā)現(xiàn)HIV/HCV共感染可以抑制MMP-3的表達(dá)，同時促進(jìn)TIMP-1的表達(dá)。但EPM并不影響MMP-3的表達(dá)，但可以促進(jìn)TIMP-1表達(dá)而影響肝纖維化的進(jìn)展。
　　5.EPM通過FAK-ERK信號通路調(diào)控TIMP-1的表達(dá)

9、
　　我們發(fā)現(xiàn)HIV/HCV共感染組FAK-ERK表達(dá)明顯上調(diào)，EPM同樣能夠促進(jìn)此信號通路激活。通過ERK抑制劑等實驗發(fā)現(xiàn)，ERK抑制后能顯著降低TIMP-1的表達(dá)，這證明EPM調(diào)控TIMP-1是通過FAK-ERK實現(xiàn)的。
　　結(jié)論：綜上所述，本課題通過考察HIV與HCV共感染后肝星狀細(xì)胞表達(dá)EPM的變化，并進(jìn)一步研究了其變化后的作用和機(jī)制，證明EPM能夠促進(jìn)肝星狀細(xì)胞的激活，并且能夠通過FAK-ERK途徑促進(jìn)TIMP-1