胍丁胺對(duì)嚴(yán)重創(chuàng)傷小鼠肝功能的保護(hù)作用及分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　探討胍丁胺對(duì)嚴(yán)重創(chuàng)傷小鼠肝功能的保護(hù)作用及其分子機(jī)制研究
　　方法：
　　1.將42只成年BALB/c小鼠按隨機(jī)數(shù)字法分為對(duì)照組、模型組、胍丁胺治療組（雙后肢骨折+失血35％+胍丁胺200mg/kg），每組14只。采用雙后肢骨折聯(lián)合眼眶放血35%的方法制備小鼠創(chuàng)傷模型。胍丁胺組于制模后非限制性復(fù)蘇時(shí)腹腔注射胍丁胺200 mg/kg；模型組給予等量生理鹽水；對(duì)照組僅麻醉小鼠，不進(jìn)行其他處理。各組于制模后12

2、h、24 h分別處死7只小鼠，取血和肝組織。
　　2.自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）及乳酸脫氫酶（LDH）水平；蘇木素-伊紅（HE）染色后觀察肝組織病理學(xué)變化；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)血清及肝組織中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素（IL-6）的含量。
　　3.制模后的各組小鼠，各自分離并培養(yǎng)Kupffer細(xì)胞，ELISA法檢測(cè)Kupffer細(xì)胞上清中TNF-α、

3、IL-6含量，實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)Kupffer細(xì)胞中TNF-α和IL-6的mRNA表達(dá)，Western Blot檢測(cè)Kupffer細(xì)胞胞漿NF-κB相關(guān)蛋白的表達(dá)，ELISA檢測(cè)Kupffer細(xì)胞NF-κBp65DNA結(jié)合力。
　　結(jié)果：
　　1.對(duì)照組肝組織結(jié)構(gòu)正常；模型組制模后24 h可見(jiàn)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，肝細(xì)胞腫脹、充血、壞死，且肝功能指標(biāo)出現(xiàn)明顯異常；而胍丁胺能明顯改善上述病理學(xué)變化，

4、改善肝功能。
　　2.制模后12 h，3組小鼠肝組織TNF-α和IL-6水平均無(wú)明顯差異；制模后24 h，模型組肝組織TNF-α、IL-6水平較12 h時(shí)升高，且均顯著高于對(duì)照組，而胍丁胺能有效降低創(chuàng)傷小鼠肝組織 TNF-α、IL-6水平[TNF-α（ng/mg）：248.7±22.5比405.2±19.6，IL-6（ng/mg）：22.5±3.1比58.4±7.7，均P<0.01）；且制模后24h，模型組血清TNF-α、IL-6

5、較對(duì)照組顯著升高，而胍丁胺能有效降低創(chuàng)傷小鼠血清TNF-α、IL-6水平[TNF-α（ng/l）：58.2±3.1比80.8±4.7，IL-6（ng/l）：74.1±6.6比104±9.0，均P<0.01）
　　3.模型組體外培養(yǎng)Kupffer細(xì)胞中TNF-α和IL-6水平均較對(duì)照組明顯升高，而胍丁胺可顯著降低TNF-α和IL-6水平[TNF-α（ng/mL）：50.4±4.8比91.2±3.6，IL-6（ng/mL）：386.2

6、±24.6比609.5±23.5，均P<0.01]，并下調(diào)TNF-α和IL-6的mRNA表達(dá)[TNF-α：4.3±0.3比8.7±0.4，IL-6：3.2±0.3比6.7±0.5，均P<0.01）。創(chuàng)傷失血模型后24h分離出的Kupffer細(xì)胞，體外培養(yǎng)約2.5h，此時(shí)NF-κB信號(hào)通路激活，在模型中我們發(fā)現(xiàn)IκB發(fā)生磷酸化并降解，p65磷酸化后入核，而胍丁胺組，IκB的磷酸化被明顯抑制，IκB的降解也減少，從而抑制了NF-κB p65

7、的磷酸化和入核。Kupffer細(xì)胞進(jìn)行核內(nèi)NF-κBp65的DNA結(jié)合活力檢測(cè)，我們發(fā)現(xiàn)，模型組NF-κB p65與DNA的結(jié)合顯著增多，而胍丁胺組，NF-κB p65的DNA結(jié)合活力明顯降低。
　　結(jié)論：
　　1.胍丁胺能夠明顯降低嚴(yán)重創(chuàng)傷小鼠血清中ALT、AST、LDH的水平，改善肝臟的病理學(xué)變化。
　　2.胍丁胺能夠抑制嚴(yán)重創(chuàng)傷小鼠血清及肝組織中炎性因子TNF-α、IL-6的產(chǎn)生，減輕肝臟損傷。
　　3.胍