CNHLPP中對3313條cDNA基于酵母雙雜交方式的蛋白質(zhì)相互作用的研究.pdf

1、湖北大學(xué)碩士學(xué)位論文H u B e i U n i v e r s i t yM A S T E R ’S t h e s i sY 9 3 5 2 1 8C N H L P P 中對3 3 1 3 條e D N A 基于酵母雙雜交方式的蛋白質(zhì)相互作用的研究T h es t u d yo f P r o t e i n - p r o t e i nI n t e r a c t i o nf i o m3 3 1 3e D N A o

2、 f h u m a n l i v e ri nC N H L P P b y t h em e t h o d Y e a s t T w o H y b r i d專 業(yè)：遺傳學(xué)研究生：祝林指導(dǎo)老師：馬立新教授湖北大學(xué)生命科學(xué)院2 0 0 6 ．0 5本工作由巾國人肝蛋白質(zhì)組計劃( C N H L P P ) 資金資助A b s t r a c tP r o t e o m i c si s an e w r e s e a r

3、c he r ao f t h e p o s t —g e n o m i ce r a t h a ta i m sa t t h ea n a l y s i sa n di d e n t i f i c a t i o no f e n t i r ep r o t e i n sp r e s e n t i n t h ec e l lt i s s u eo rt h eo r g a n i s m ，a n do f

4、 t h ef u n c t i o n sa n d t h el i n k a g eo f t h e s e p r o t e i n s ．T h es t u d yo np r o t e o m i c sc a nm a k e u se a s i l yk n o w h o w t h e v i t a lp r o g r e s sg o e s ．T h e r e f o r e ，c o m p

5、 i l i n g P r o t e i n —p r o t e i n i n t e r a c t i o n ( P P I )n e t w o r k p r o v i d e sm a n yn e w i n s i g h t si n t o p r o t e i nf u n c t i o n ．T h eY e a s tt w oh y b r i d ( Y 2 H )s y s t e m i

6、s a p o w e r f u l t o o l f o r t h e i d e n t i f i c a t i o n o fP P I s ，w h i c h c a n b e a p p l i e d i nh i g h - t h r o n g h p u tm a n n e r t od e t e c t i n t e r a c t i o n sa c r o s st h ee n t i

7、r ep r o t e o m eo f a no r g a n i s m ．C h i n a H u m a n L i v e rP r o t e o m e P r o j e c t ( C N H L P P ) i s ap r o j e c to f g r e a ti m p o r t a n c e ．I ta i m st o r e s e a r c h t h e P r o t e i n —

8、p r o t e i n i n t e r a c t i o n ( P P I ) i nt h e h u m a nl i v e r ．T h i sw o r ko f t h et h e s i si s ap a r to f t h e p r o j e c t ．T h e p r a yv e c t o rp P C 8 6 h a d b e e nc h a n g e di n t o t h en

9、 e w p r a yv e c t o rp H B M 8 6 i n o u rl a b ．T h ev e c t o rp H B M 8 6 w a s d i g e s t e db y B g tI l 、N o tI b e f o r eu s i n g ．T h ep r i m h a db e e nd e s i g n e d ，w h i c hc o n t a i n e dt h e9 b

10、p h o m o l o g o u ss e q u e n c e o f t h ev e c t o rp H B M 8 6a n d t h er e s t r i c t i o ne n d o n u c l e a s er e c o g n i t i o ns e q u e n c e6 b p ( 1 5 b pa l t o g e t h e r ) c o r r e s p o n d i n

11、gt ot h ev e c t o rp H B M 8 6 ．T h e 3 31 3e D N A o f t h eh u m a n l i v e rw e r ea m p l i f i e d f r o mt h et e m p l a t eb yP C R ，a n dw e r ec l o n e dt ot h ep r a yv e c t o rp H B M 8 6 ．T h e3 3 1 3 r

12、e c o m b i n a n tp r a yp l a s m i dw e r e a c q u i r e d ，a n dw e r ei d e n t i f i e db y r e s t r i c t i o ne n d o n u c l e a s ed i g e s t i o na n d P C R ．T h e3 31 3 r e c o m b i n a n tp r a y p l a

13、s m i dw e r em i x e dt o f o r mt h ef u l l l e n g t hl i b r a r yo fc D N A o f t h eh u m a n l i v e r ．T h e1 6 0 b a i tp l a s m i ds a v e di no u r l a b w e r e t r a n s f e f r e di n t ot h ey e a s t (

14、S a c c h a r o m y c e s c e r e v i s i a e ) M a y 2 0 3b y t h e o n e —s t e pm e t h o d ．t h e l i q u i dw a s P l a t e dt ot h es e l e c t i v e p l a t ec o n t a i n i n gS C - L e u ，a n d t h er e c o m b

15、i n a n t s t r a i nM a V 2 0 3 ( p D B L e u —X )w a sa c q u i r e d ，t h e nt h ef u l ll e n g t h l i b r a r yo fc D N A o f t h eh u m a n l i v e rw a su s e dd ot h es e c o n dt r a n s f e r o ft h e r e c o

16、m b i n a n ts t r a i n M a v 2 0 3 ( p D B L e u —X ) ，a n d t h e r e c o m b i n a n ts t r a i nM a v 2 0 3 ( p D B L e u —X 1 ( p H B M 8 6 一Y ) w a s s c r e e n e d o n t h e p l a t e c o n t a i n g S C 一3 ．A n

17、 dt h eP P I sw e r ec o n f o r m e d b yt h ei d e n t i f i c a t i o no fs t r e a k i n go nt h es e l e c t i v ep l a t ea n do ft h e L a c Z r e a c t i o n ．K e y w o r d s ：p r o t e o m i c s ；C h i n aH u m