基于改進(jìn)的酵母雙雜交技術(shù)平臺(tái)研究HBX與人肝蛋白的相互作用.pdf

1、乙型肝炎病毒是嚴(yán)重威脅人類健康的一種病毒，特別是對(duì)于我國(guó)來(lái)說(shuō)。乙型肝炎病毒的X基因只有154個(gè)氨基酸，但是它的功能十分復(fù)雜。其對(duì)人肝細(xì)胞有短期和長(zhǎng)期的影響。了解HBX與肝細(xì)胞相互作用的結(jié)果是研究該疾病發(fā)生的生理和分子機(jī)制的基礎(chǔ)。本論文利用改進(jìn)的酵母雙雜交技術(shù)平臺(tái)來(lái)研究HBX蛋白質(zhì)與寄主蛋白的相互作用，其內(nèi)容主要有以下幾個(gè)方面：
　　 (1)酵母雙雜交誘餌載體pDBleu-X的構(gòu)建。最初的雙雜交系統(tǒng)是invitrogen公司的PR

2、OQUSTTM Two-hybrid system，后經(jīng)實(shí)驗(yàn)室改造在誘餌pDBLeu載體插入一個(gè)帶有強(qiáng)啟動(dòng)子Prrn的GFP作為反選擇標(biāo)記。通過(guò)無(wú)酶克隆的方式將HBX基因裝入pDBleu中。
　　 (2)構(gòu)建5×cDNA有限文庫(kù)，并且鑒定文庫(kù)的質(zhì)量。
　　 (3)將pDBleu-X轉(zhuǎn)化Mav203后，進(jìn)行自激活的檢測(cè)和3AT濃度的確定。利用改進(jìn)的雙雜交系統(tǒng)，篩選人類肝臟cDNA文庫(kù)，對(duì)于篩選到的陽(yáng)性克隆經(jīng)質(zhì)粒拯救、經(jīng)過(guò)P