規(guī)?；湍鸽p雜交技術(shù)平臺(tái)的建立及人CtBP2與CCNH蛋白相互作用的研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文規(guī)?；湍鸽p雜交技術(shù)平臺(tái)的建立及人CtBP2與CCNH蛋白相互作用的研究姓名：馬雅婷申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：霍克克20070430復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要本論文在建立了一種規(guī)?；慕湍鸽p雜交技術(shù)平臺(tái)的基礎(chǔ)上，利用該平臺(tái)分別進(jìn)行了神經(jīng)退行性疾病相關(guān)蛋白及人類蛋白C t B P 2 的酵母雙雜交篩選；重點(diǎn)對(duì)人類C t B P 2 和C C N H 蛋白之間的相互作用進(jìn)行了研究。為了研究人類肝臟中的蛋白

2、質(zhì)相互作用的連鎖網(wǎng)絡(luò)、從而揭示其功能和作用模式，我們探索建立了一種規(guī)?；慕湍鸽p雜交技術(shù)平臺(tái)。該平臺(tái)的特點(diǎn)是利用酵母接合的原理采用高通量自動(dòng)化移液機(jī)器人系統(tǒng)進(jìn)行規(guī)?；慕湍鸽p雜交篩選研究。為此，我們?cè)趯?duì)該平臺(tái)的無(wú)菌化操作、菌液點(diǎn)樣條件、自動(dòng)化程序設(shè)置，數(shù)據(jù)采集和處理等方面進(jìn)行了探索和優(yōu)化。在此基礎(chǔ)上，我們利用這個(gè)平臺(tái)對(duì)人類肝臟的1 5 3 6 個(gè)A D 克隆與1 2 4 8 個(gè)B D 克隆進(jìn)行了規(guī)?；慕湍鸽p雜交篩選，得到了1 8 4

3、對(duì)相互作用，并對(duì)這些相互作用進(jìn)行了初步的分析。神經(jīng)退行性疾病是神經(jīng)組織非正常退變引起的一類嚴(yán)重威脅人類生存質(zhì)量的重要疾病。為了研究該疾病發(fā)生發(fā)展的作用機(jī)理，我們選擇了四個(gè)與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的蛋白P R N P ，P S E N I ，B D N F 和G F A P 分別對(duì)上述1 0 0 0 個(gè)A D 克隆進(jìn)行了酵母雙雜交篩選，共得到了7 5 對(duì)相互作用，并利用生物信息學(xué)軟件對(duì)這些相互作用進(jìn)行了初步的分析．C t B P 2 是一種針

4、對(duì)多種轉(zhuǎn)錄物的輔阻遏因子。為了深入研究C t B P 2 的功能和的作用機(jī)制，我們以C t B P 2 為誘餌進(jìn)行了酵母雙雜篩選，首次篩選發(fā)現(xiàn)了其與細(xì)胞周期蛋白C C N H 之間的相互作用。我們利用體外及體內(nèi)結(jié)合實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證了二者之間的相互作用，確定了結(jié)合的區(qū)域，并且首次發(fā)現(xiàn)C t B P 2 與C C N H 共定位于細(xì)胞核。二者的相互作用的發(fā)現(xiàn)為進(jìn)一步研究它們的功能提供了新的線索。關(guān)鍵詞酵母雙雜交，蛋白質(zhì)．蛋白質(zhì)相互作用，神經(jīng)退行性