人ATP結(jié)合盒超家族蛋白相互作用蛋白的規(guī)?；l(fā)掘.pdf

1、ATP結(jié)合盒超家族轉(zhuǎn)運蛋白[TheATP-bindingcassette(ABC)transportersuperfamily]屬于一類分布廣泛、數(shù)目眾多的跨膜轉(zhuǎn)運體系。它們可以轉(zhuǎn)運代謝產(chǎn)物、離子、糖、氨基酸、脂類、固醇以及藥物等多種底物通過細胞內(nèi)、外膜。一些特定的ABC轉(zhuǎn)運蛋白在多藥耐性的腫瘤細胞系或癌癥過表達，與臨床耐藥密切相關(guān)。這些基因的突變可能直接和間接導致多種遺傳疾病。而目前關(guān)于ATP結(jié)合盒超家族轉(zhuǎn)運蛋白具體轉(zhuǎn)運機制以及功能還

2、未完全了解。關(guān)于其與細胞內(nèi)蛋白的相互作用研究甚少。規(guī)模化進行蛋白質(zhì)相互作用研究可能發(fā)現(xiàn)其更精確的轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)機制并揭示新的功能。 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用是一切生命活動的基礎，揭示相互作用規(guī)律是認識生命奧秘的必經(jīng)之路。酵母雙雜交技術(shù)是目前應用最成功的大規(guī)模研究蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)平臺，規(guī)模化酵母雙雜交技術(shù)不是常規(guī)實驗室酵母雙雜交技術(shù)在誘餌數(shù)量上的簡單增加，需要解決大量的技術(shù)問題。本文以ATP結(jié)合盒超家族轉(zhuǎn)運蛋白為研究對象，摸索規(guī)模化酵

3、母雙雜交研究蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)條件，優(yōu)化各關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)，完善可用于規(guī)?；鞍紫嗷プ饔醚芯康慕湍鸽p雜交技術(shù)平臺；發(fā)現(xiàn)20對高可信的蛋白相互作用。結(jié)果對采用酵母雙雜交技術(shù)規(guī)?；芯康鞍踪|(zhì)相互作用提供可借鑒的經(jīng)驗，發(fā)現(xiàn)的相互作用有助于揭示ABC蛋白的轉(zhuǎn)運機制，并為其新功能的認識提供重要的功能線索。 本文采用酵母雙雜交技術(shù)，選取具有重要功能，代表6類亞家族的14種ATP結(jié)合盒超家族轉(zhuǎn)運蛋白ABCA1、ABCA5、ABCA6、ABCB1

4、、ABCB11、ABCB4、ABCC1、ABCC13、ABCC2、ABCC3、ABCC5、ABCC6、ABCF1、ABCG8的胞質(zhì)區(qū)(C端或者N端)為誘餌，篩選成人肝cDNA文庫，得到67種不同的相互作用。在對相互作用數(shù)據(jù)的初步分析中，除去不符合讀框和常見假陽性，經(jīng)過回轉(zhuǎn)驗證，得到20對可信度較高的相互作用。這些相互作用提示ATP結(jié)合盒超家族轉(zhuǎn)運蛋白可能有許多新的功能，同時也揭示可能存在共同的轉(zhuǎn)運機制。如發(fā)現(xiàn)ABCC2與NF-κB1的相

5、互作用，提示ABBC2可能作為一個受體，參與NF-κB信號通路的激活和調(diào)節(jié)。 用GO(geneontology)進行功能注釋，發(fā)現(xiàn)相互作用蛋白中有參與物質(zhì)轉(zhuǎn)運過程的，也有參與細胞信號轉(zhuǎn)導等其它生理學過程的，表明ABC蛋白除了發(fā)揮物質(zhì)轉(zhuǎn)運的功能外，還可能參與信號轉(zhuǎn)導、細胞凋亡、增殖等過程調(diào)控。 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用是一切生命活動的基礎，揭示相互作用規(guī)律是認識生命奧秘的必經(jīng)之路。蛋白質(zhì)相互作用研究從規(guī)模上分為單個相互作用研