過敏性休克小鼠體內(nèi)NO含量、NOS的活性與Eotaxin的表達及其法醫(yī)學(xué)意義.pdf

1、目的：觀察組胺和一氧化氮(nitric oxide，NO)在過敏性休克小鼠肺組織中隨時間變化的規(guī)律，探討NO及嗜酸性粒細胞趨化因子(Eotaxin)在過敏性休克中的作用，試圖為過敏性猝死的法醫(yī)學(xué)鑒定提供可靠的形態(tài)學(xué)依據(jù)。 方法：(1)將小鼠隨機分為實驗組和對照組，實驗組采用卵蛋白致敏小鼠，建立過敏性休克模型。分別于休克不同時間段(休克前、休克后0.5h、休克后12h、休克后24h、休克后48h)提取小鼠肺組織；(2)采用Shor

2、e等熒光測定法并加以改良測定肺組織中的組胺含量隨休克時間的變化；(3)采用硝酸鹽還原法檢測肺組織中NO含量隨休克時間變化；(4)通過血管通透性測定實驗，證實NO與血管的通透性升高有直接的關(guān)系；(5)應(yīng)用酶組織化學(xué)技術(shù)對一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)染色；(6)應(yīng)用免疫組化SABC法對Eotaxin進行染色，并用BI-2000計算機圖像分析系統(tǒng)進行圖像分析，計算陽性積分光密度值(IOD)。 結(jié)果

3、：(1)致敏組動物在致敏原激發(fā)前肺組織中組胺含量明顯高于正常對照組(P<0.01)。致敏原激發(fā)時即刻迅速下降，低于正常對照組，僅為激發(fā)前的40％，差異非常顯著。以后呈逐漸回升趨勢，12h以后即高于正常對照組，48h后回升為激發(fā)前的95％，基本接近于激發(fā)前水平。而正常對照組動物組織中組胺含量則始終無明顯變化。(2)致敏組動物在致敏原激發(fā)前肺組織中NO含量明顯高于正常對照組(P<0.01)。致敏原激發(fā)時即刻迅速下降，低于正常對照組，僅為激發(fā)

4、前的49％，差異非常顯著。以后呈逐漸回升趨勢，12h以后即高于正常對照組，48h后回升為激發(fā)前的96％，基本接近于激發(fā)前水平。而正常對照組動物組織中NO含量則始終無明顯變化。(3)NOS酶組織化學(xué)染色顯示：實驗組為陽性染色，表明當(dāng)過敏性休克發(fā)生時，NOS的活性大大增強。(4)IHC結(jié)果顯示：與對照組相比，實驗組Eotaxin表達明顯增加。 結(jié)論：過敏性休克時，小鼠肺組織內(nèi)組胺和NO的含量在過敏性休克發(fā)病過程有著動態(tài)的變化，經(jīng)統(tǒng)計

5、學(xué)分析，過敏性休克小鼠肺組織中組胺含量與NO含量呈正相關(guān)，且相關(guān)性非常顯著，而且通過血管通透性實驗也證實NO與血管通透性升高有直接的關(guān)系，為進一步應(yīng)用酶組織化學(xué)對NOS染色來診斷過敏性休克的發(fā)生提供了實驗上的支持。并且發(fā)現(xiàn)隨著過敏性休克發(fā)生，小鼠肺組織中的Eotaxin表達明顯增加，與對照組相比有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。因此，應(yīng)用酶組織化學(xué)技術(shù)對NOS染色和免疫組化技術(shù)對Eotaxin進行染色，可以為法醫(yī)學(xué)過敏性休克急死提供客觀的輔助診斷依據(jù)