NT-3通過激活BMP信號通路來促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向類神經(jīng)細(xì)胞分化.pdf

1、目的:
　　本實驗主要研究利用質(zhì)粒向骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)中導(dǎo)入神經(jīng)營養(yǎng)因子-3(NT-3)基因，觀察BMSC是否可向類神經(jīng)樣細(xì)胞方向分化，并探討在間充質(zhì)干細(xì)胞中轉(zhuǎn)染的NT-3基因與BMP信號通路關(guān)系。
　　方法:
　　先從大鼠股骨干中提取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，取等量細(xì)胞分別對其進(jìn)行處理:只加PBS（空白對照A組）、轉(zhuǎn)染plRES2-EGFP（空載體轉(zhuǎn)染B組），轉(zhuǎn)染plRES2-EGFP-NT-3（轉(zhuǎn)染C組）和加入

2、BMP4因子（D組）。在轉(zhuǎn)染plRES2-EGFP-NT-3的BMSCs中在分別添加noggin（E組）和利用siRNA技術(shù)沉默其Trkc基因（F組）。利用免疫熒光、PCR、western、全細(xì)胞膜片鉗、細(xì)胞內(nèi)鈣離子等檢測手段觀察NT-3因子轉(zhuǎn)染率情況和BMSCs的形態(tài)學(xué)變化、神經(jīng)功能檢測、神經(jīng)細(xì)胞特異性因子表達(dá)情況。同時分析NT-3因子與Trkc蛋白表達(dá)和BMP信號通路及其下游Smad表達(dá)的變化的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　

3、脂質(zhì)體介導(dǎo)的plRES2-EGFP-NT-3成功轉(zhuǎn)染到BMSC中并且高表達(dá)神經(jīng)細(xì)胞特異性因子Nestin、NSE和MAP-2，說明NT-3能夠促進(jìn)BMSC分化為具有一定神經(jīng)功能的類神經(jīng)元細(xì)胞。同時利用western檢測我們發(fā)現(xiàn)NT-3因子可以促進(jìn)BMP增多，激活下游Smad磷酸化。在加入BMP的拮抗劑Noggin后，NT-3促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)分化作用減弱，表達(dá)神經(jīng)細(xì)胞特異性因子減少。在利用siRNA基因沉默技術(shù)沉默BMSC受體Trkc