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文檔簡介
1、研究背景:
中樞神經(jīng)的不可再生已經(jīng)成為共識,因此尋找其他可以修復或替代的方法成為當下研究的熱點。在發(fā)達國家,脊髓損傷的發(fā)生率大約為13.3~45.9人/百萬人/年;據(jù)不完全統(tǒng)計,在中國每年大約新增一萬左右的脊髓損傷患者。在損失大量社會勞動力的同時,醫(yī)療費用支出也成為社會和家庭的巨大負擔。
近年來,隨著細胞工程技術的發(fā)展,細胞移植治療脊髓損傷成為研究的熱點。神經(jīng)干細胞、成纖維細胞、嗅鞘細胞、巨噬細胞等在修復脊髓
2、損傷方面取得了一定的療效,但是尚不能滿足我們的需要。尋找更好的種子細胞,成為治療脊髓損傷有可能取得重大突破的途徑之一。骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)自發(fā)現(xiàn)以來,大量的試驗充分證明其在體外向結(jié)締組織包括骨、軟骨、骨骼肌、脂肪、韌帶等方面的分化能力。Kopen等報道將骨髓間充質(zhì)干細胞注入新生鼠側(cè)腦室后,最終分化成為了神經(jīng)膠質(zhì)細胞。骨髓間充質(zhì)干細胞開始用于脊髓損傷的治療。但單純的骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療脊髓損傷療效有限。Abouelfetou
3、h等人將骨髓間充質(zhì)干細胞在體外與海馬組織薄片共培養(yǎng),最終分化成為了神經(jīng)細胞。
本實驗采用生物誘導和化學誘導兩種方法,對骨髓間充質(zhì)干細胞進行定向誘導,最終使其分化為能夠表達神經(jīng)細胞特異性標志的類神經(jīng)細胞,將誘導后的類神經(jīng)細胞移植入制備好的脊髓損傷的動物模型中。通過對模型動物肢體的運動功能恢復情況和脊髓切片組織學變化的觀察,研究骨髓間充質(zhì)干細胞在定向誘導分化為神經(jīng)細胞后,移植治療脊髓損傷的效果。該實驗為臨床上采用骨髓間充質(zhì)干細
4、胞移植治療脊髓損傷提供理論依據(jù)。
研究目的:
通過對脊髓損傷模型大鼠的行為對比及生化指標的檢測,研究骨髓間充質(zhì)干細胞誘導分化為類神經(jīng)細胞后移植對脊髓損傷的療效。
研究方法:
取4W雄性Wistar大鼠骨髓分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞,對第三代骨髓間充質(zhì)干細胞分別進行化學誘導和生物因子誘導后,收集備用。8W雄性Wistar大鼠48只,采用Allens打擊法建立大鼠的脊髓損傷模型,隨機分為
5、四組:骨髓間充質(zhì)干細胞組、化學誘導組、生物誘導組和DMEM培養(yǎng)液組,一周后骨髓間充質(zhì)干細胞組損傷部位局部注射第三代骨髓間充質(zhì)干細胞,化學誘導組局部注射化學誘導成的神經(jīng)細胞,生物誘導組局部注射生物誘導成的神經(jīng)細胞,DMEM培養(yǎng)液組局部注射細胞培養(yǎng)液。對48只大鼠脊髓損傷模型分別于傷后1、2、3、4、6、8、10、12周進行BBB評分,并于第12周末對損傷部位進行取材做組織切片,觀察脊髓損傷的修復情況。
研究結(jié)果:
6、 模型建立后12周,骨髓間充質(zhì)干細胞組、化學誘導組和生物誘導組大鼠后肢功能恢復明顯優(yōu)于DMEM培養(yǎng)液組,且統(tǒng)計學有顯著差異(P<0.05),骨髓間充質(zhì)干細胞組和化學誘導組功能恢復無明顯差別(P=0.4363),生物誘導組恢復效果好于前兩組,且統(tǒng)計學有顯著差異(P<0.05)。脊髓組織切片HE染色顯示骨髓間充質(zhì)干細胞組和化學誘導組近似,脊髓膠質(zhì)細胞增生,神經(jīng)細胞崩解、空洞形成少于DMEM培養(yǎng)液組,生物誘導組神經(jīng)損傷修復效果最佳。
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