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1、目的:利用甲強(qiáng)龍(MP)藥理學(xué)機(jī)制和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)生物特點(diǎn),探討甲強(qiáng)龍(MP)在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠脊髓損傷(SCI)中作用機(jī)制及其特點(diǎn)。
方法:取雄性SD大鼠4周齡4只,分別處死并分離股骨、脛骨獲得骨髓,在全貼壁法下培養(yǎng)并鑒定第3代BMSCs,收集備用并用BrdU染色作細(xì)胞標(biāo)記。取SD大鼠6月齡40只,隨機(jī)等分為4組。A組(對(duì)照組)和B組(甲強(qiáng)龍治療組)、C組(BMSCs治療組)、D組(甲強(qiáng)龍+BMSCs
2、聯(lián)合治療組),按上述分組采用改良Allen法制備T10脊髓損傷雄性大鼠模型,B組造模后立即尾靜脈緩慢推注甲強(qiáng)龍(30mg/kg),C組造模后2h注射BrdU標(biāo)記的BMSCs懸液2mL,D組給予以上兩種干預(yù)方法。采用BBB評(píng)分法評(píng)估術(shù)后1d、3d、7d、10d、14d大鼠后肢神經(jīng)功能狀況,14d后處死各組大鼠并取出損傷部位的脊髓樣本,分別進(jìn)行TNF-α、IL-1β免疫組織化學(xué)染色,Tunel染色,各組統(tǒng)計(jì)5個(gè)高倍視野內(nèi)TNF-α、IL-1
3、β表達(dá)平均陽性細(xì)胞數(shù)并檢測(cè)細(xì)胞凋亡指數(shù);另外,對(duì)比C組和D組中BMSC存活率。用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS20.0分析。
結(jié)果:術(shù)后1d,四組大鼠后肢神經(jīng)功能較術(shù)后均無明顯提高,組間BBB評(píng)分的比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。術(shù)后3d,B組和D組BBB評(píng)分在較術(shù)后1d均升高(P<0.05),C組與A組仍無明顯差異,與A組比較,B組和D組評(píng)分比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);術(shù)后7、10、14天,四組均較前一時(shí)間點(diǎn)升高(P<0.
4、05),其中B,C,D組明顯高于A組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);D組明顯高于B,C組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);免疫組化染色顯示B組和C組的TNF-α及IL-1β平均陽性細(xì)胞數(shù)均明顯低于A組;D組明顯高于B組和C組的TNF-α及IL-1β平均陽性細(xì)胞數(shù);BrdU染色顯示C組BMSC的陽性率為明顯低于D組,兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:1、甲強(qiáng)龍和BMSCs移植均可改善SCI大鼠的神經(jīng)功能恢復(fù)
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