骨髓間充質(zhì)干細胞靜脈移植對損傷大鼠脊髓VEGF、bFGF表達及血管新生的影響.pdf

1、目的： 將標記熒光的骨髓間充質(zhì)干細胞(bone mesenchymal stem cells，MSCs靜脈移植到脊髓損傷(spinal cord injury，SCI)大鼠模型體內(nèi)，觀察MSCs在損傷區(qū)的存活及血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelialgrowth factor，VEGF)和堿性成纖維生長因子(basic fibroblastgrowth factor，bFGF)表達和血管新生情況，為MSCs移植

2、治療SCI及其機理提供實驗依據(jù)。 方法： 1.體外分離培養(yǎng)MSCs，流式細胞儀檢測其表面標志。 2.實驗動物分組：成年健康SD雄鼠42只(體重200g-250g)，隨機平均分成7組，每組6只，即3組為MSCs移植組；3組為對照組：1組為正常組 3.脊髓損傷模型的制備：用自制改良的Allen裝置撞擊脊髓T12節(jié)段，建立脊髓外傷性截癱模型。 4.羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯(carboxyfluor

3、esceinsuccinimidyl ester，CFSE)體外標記MSCs 5.MSCs移植MSCs移植組6只：術(shù)后3天經(jīng)尾靜脈注射MSCs對照組6只：注射等量磷酸緩沖鹽溶液(phosphate-bufferedsal ine，PBS) 6.取材和檢測 6.1心臟灌注、取材、切片 6.2激光共聚焦顯微鏡觀察CFSE標記的MSCs在體內(nèi)存活情況及分泌生長因子VEGF和bFGF的情況。 6.3逆轉(zhuǎn)錄

4、-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcription-Polymerase ChainReaction，RT-PCR)法檢測VEGF和bFGFmRNA表達變化情況。 6.4免疫組化檢測第VIII因子相關(guān)抗原表達情況 6.5采用Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)評分和爬網(wǎng)格訓(xùn)練評估大鼠行為學(xué)改變。 統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果： 1.激光共聚焦顯微鏡顯示脊髓損傷后經(jīng)尾靜脈移植的MSCs可達到脊

5、髓損傷處聚集、存活且可以分泌生長因子VEGF和bFGF。 2.RT-PCR結(jié)果顯示VEGF和bFGFmRNA表達在損傷后比正常增高；移植后1天，MSCs移植組與對照組相比(P>0.05)，無統(tǒng)計學(xué)意義；移植后3天和14天，MSCs移植組均高于同一時間段的對照組且隨時間延長表達持續(xù)升高。 3.第VIII因子相關(guān)抗原免疫組化結(jié)果顯示：移植后1天，MSCs移植組與對照組相比(P>0.05)，無統(tǒng)計學(xué)意義；移植后3天和14天，M