植物重組酶編碼基因的克隆和過表達(dá)研究.pdf

1、葉綠體遺傳工程擁有良好前景，然而這方面的成果集中在煙草等少數(shù)幾種植物。同源重組過程是葉綠體基因組轉(zhuǎn)化的限速步驟之一。在提高葉綠體轉(zhuǎn)化中外源基因的整合效率方面，前人鮮有嘗試。同時，參與同源重組的關(guān)鍵酶RecA，在植物葉綠體中罕有報道。
　　 本實(shí)驗使用3種植物（擬南芥、百脈根和煙草），試圖通過參與同源重組的重組酶基因的克隆，及其在目的植物中的過表達(dá)，提高葉綠體基因組轉(zhuǎn)化技術(shù)的效率。
　　 本實(shí)驗提取了擬南芥總RNA，并通過

2、RT-PCR技術(shù)，用特異引物克隆到已知基因AtrecA。并利用它和植物表達(dá)載體pPGN構(gòu)建了適于百脈根浸染的pPGN-AtrecA。隨后將其轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌LBA4404，浸染百脈根子葉。在浸染十余批后，獲得了兩批出芽的愈傷組織，前一批白化死亡，后一批仍在繼續(xù)篩選。
　　 本實(shí)驗提取了百脈根總RNA，并通過RT-PCR技術(shù)，試圖用特異引物克隆百脈根已知EST序列，但未獲成功。
　　 本實(shí)驗提取了煙草總RNA，并通過RT-PCR