差異蛋白質組學在Poly(I-C)誘導的大黃魚肝臟中的研究及兩種免疫相關基因的克隆和鑒定.pdf

1、大黃魚(Pseudosciana crocea)是我國特有的經(jīng)濟魚種,以其味道鮮美,營養(yǎng)豐富和極高的藥用價值而受到青睞,在大黃魚人工育苗和網(wǎng)箱養(yǎng)殖等技術相繼成熟之后,人工養(yǎng)殖得到迅猛發(fā)展。由于養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大和養(yǎng)殖環(huán)境日益惡化,導致大面積病毒性疾病的爆發(fā),給大黃魚的養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的損失。在本研究中,我們利用蛋白質組學的高通量高分辨力對對照組和Poly(I:C)注射組的大黃魚肝臟樣品做進一步研究,旨在從分子水平角度對魚類的抗病機制做初

2、步的探索。通過比較對照組和注射組肝臟樣品的雙向電泳圖譜,我們在肝臟樣品找到30個差異點,并利用MALDI-TOF-MS做肽質量指紋圖譜分析,進一步對其中16個差異點做串聯(lián)質譜MALDI-TOF-TOF分析,得到了13個點的肽段。在對大黃魚抗病機制的研究中,我們查詢這些差異點的功能發(fā)現(xiàn),有13.3％的差異點是免疫相關蛋白,40％的差異點是代謝酶類,10％的差異點是調控蛋白類,13.3％的差異點是轉錄/翻譯蛋白類,13.3％的差異點是結構蛋

3、白類,10％的差異點功能未知。
　　 在人的細胞中,干擾素誘導跨膜蛋白1是一個蛋白復合物的組分,該復合物與同型粘連和抗增殖信號的轉換密切相關。在本研究中,克隆了大黃魚IFITM1基因全長734個核苷酸的cDNA序列,它編碼124個氨基酸的蛋白,分子量為13.6 KD。推測的蛋白與哺乳動物和魚類已知的干擾素誘導跨膜蛋白有較高的同源性,并且有IFITM典型的結構特征,包括兩個保守的跨膜區(qū)和它們之間的胞內區(qū),一個位于胞內區(qū)的保守的PK

4、C磷酸化位點(aa65-67,SIR)。進化分析顯示LycIFITM1與魚類IFITM形成獨立一支。組織表達分布研究顯示LycIFITM1基因在所檢測的所有組織中都有表達,包括腸、鰓、心、肌、脾、肝、血和腎。經(jīng)Poly(I:C)誘導24小時后IFITM1在鰓、腎、心和脾中表達明顯上調,揭示LycIFITM1可能與Poly(I:C)刺激產(chǎn)生的免疫反應有關。,熒光定量PCR結果顯示:在Poly(I:C)刺激下LycIFITM1的mRNA在脾

5、臟和腎臟的轉錄水平都在24小時達到最高,分別是正常水平的48.7和280.4倍。以上結果說明LycIFITM1基因是魚類IFITM家族的成員。
　　 在本研究中,克隆了大黃魚CXCL12基因全長678個核苷酸的cDNA序列,它編碼97個氨基酸的蛋白,分子量為11.1KD,包含一個22個氨基酸的信號肽和75個氨基酸的成熟肽。四個半胱氨酸殘基是CXC趨化因子空間結構和功能所必需的,LycCXCL12蛋白含有這4個保守的半胱氨酸殘基(

6、在第31,33,56和71位)。推斷的蛋白和其他已知的魚類CXCL12趨化因子有57％-68％的同源性,和其他脊椎動物有32％-36％的同源性。進化分析顯示LycCXCL12和CXCL12亞族的關系最近。組織表達分布研究顯示LycCXCL12基因在所檢測的所有組織中都有表達,包括腸、鰓、心、肌、脾、肝、血和腎。經(jīng)Poly(I:C)和三聯(lián)滅活細菌疫苗誘導24小時后,LycCXCL12基因在鰓、肝、腎、血和脾中表達明顯上調,三聯(lián)疫苗刺激引起