IGFBP-rP1通過調(diào)控MEK-ERK信號通路抑制子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細胞的生長.pdf

1、背景與目的:
　　子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤最常見的三大腫瘤之一，具體發(fā)病機制不詳。以肥胖、高血壓、2型糖尿病為主要表現(xiàn)的代謝綜合征（MS）是子宮內(nèi)膜癌發(fā)病的高危因素。MS是一組多種代謝物質(zhì)異常聚集造成代謝紊亂的癥候群，其病理生理基礎(chǔ)是胰島素抵抗及繼發(fā)的高胰島素血癥，繼而并發(fā)2型糖尿病。
　　胰島素生長因子（Insuline-like growth factor，IGF）系統(tǒng)是胰島素抵抗的中心環(huán)節(jié)，在能量代謝方面發(fā)揮重

2、要作用還與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。IGF系統(tǒng)包括胰島素生長因子（IGF）及其受體，胰島素生長因子結(jié)合蛋白（insulin like growth factor binding proteins，IGFBPs）及相應的水解酶。胰島素生長因子相關(guān)蛋白結(jié)合蛋白1（insulin like growth factor binding protein-related protein， IGFBP-rP1）是IGFBPs超家族中的一名新成員，與

3、IGFBP-rP1結(jié)合后的胰島素失去活性，降低外周血胰島素有效活性，進而引起胰島素抵抗。研究證明IGFBP-rP1在結(jié)直腸癌、乳腺癌、前列腺癌中作為一種抑癌基因發(fā)揮作用，其在子宮內(nèi)膜癌中的作用未見報道。MEK/ERK信號通路異常與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，在多種致瘤性疾病中表達是上調(diào)的，通路持續(xù)激活，細胞增殖失控，凋亡受阻。在口腔癌、黑色素瘤、乳腺癌中都可發(fā)現(xiàn)ERK1/2信號通路的過度激活。采用添加外源性胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1

4、（ IGFBP-rP1）聯(lián)合MEK/ERK信號通路抑制劑PD98059，觀察其對子宮內(nèi)膜癌細胞HEC-1A增殖凋亡的影響，探討IGFBP-rP1對子宮內(nèi)膜癌發(fā)揮作用的機制。
　　方法:
　　1.體外培養(yǎng)人子宮內(nèi)膜癌細胞HEC-1A細胞，向培養(yǎng)基中添加不同濃度人重組胰島素生長因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1（Recombinant Human IGFBP-rP1， rhIGFBP-rP1）和PD98059，人為上調(diào)IGFBP-rP1的水

5、平。
　　2.采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法檢測不同濃度rhIGFBP-P1及rhIGFBP-P1聯(lián)合MEK/ERK信號通路抑制劑PD98059對HEC-1A細胞增殖的影響。
　　3.蛋白免疫印跡（western blot）法分析不同濃度rhIGFBP-rP1作用下子宮內(nèi)膜癌細胞HEC-1A細胞總的ERK1/2和磷酸化ERK1/2水平變化。
　　4.統(tǒng)計學方法：采用 SPSS17.0統(tǒng)計軟件

6、進行統(tǒng)計分析，所得結(jié)果以均數(shù)±標準差（s）表示，采用單因素方差分析進行檢驗。以檢驗水準α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。.
　　結(jié)果:
　　1.CCK-8法示添加 rhIGFBP-rP1子宮內(nèi)膜癌細胞 HEC-1A增殖受到明顯抑制，其抑制作用呈濃度和時間依賴性,2μg/ml,4μg/ml,8μg/ml,16μg/ml的rhIGFBP-rP1對HEC-1A的抑制率分別是（16.58±1.72）％，（30.04±0.

7、94）%，（58.74±1.29）%，（81.89±0.87）%，（P＜0.05），IC50=6.39μg/ml；4μg/ml rIGFBP-rP1對HEC-1A增殖抑制作用隨著時間延長越來越明顯，12、24、48、72小時增殖抑制率分別為（8.25±2.65）%、（13.98±1.41）%、（24.82±1.90）%、（30.04±0.94）%（P＜0.05）。
　　2.MEK/ERK通路抑制劑PD98059能增強其抑制作用，r

8、IGFBP-rP1(4μg/ml)與 PD98059(25umol/L)聯(lián)用，以上各時間點細胞增殖抑制率分別增至（10.04±2.71）%、（17.02±1.58）%、（28.59±2.04）%、（35.29±1.12）%（P＜0.05），western blot示添加rhIGFBP-rP1，磷酸化的ERK1/2水平顯著降低，磷酸化的ERK1/2水平與rhIGFBP-rP1呈劑量依賴性。
　　結(jié)論:
　　1.rhIGFBP-