芹菜素在百草枯所致急性肺損傷中的作用研究.pdf

1、背景：急性肺損傷是一種以內(nèi)皮-上皮屏障受損為基礎(chǔ)的非心源性肺水腫，可由多種直接或間接的損傷因素引起，如肺炎、創(chuàng)傷、中毒等。百草枯（paraquat，PQ）中毒所產(chǎn)生的早期肺部病變即屬于毒物引起的急性肺損傷。在肺組織中，百草枯的毒性將導(dǎo)致受損細(xì)胞的凋亡。在急性破壞期，I型和II型肺泡上皮細(xì)胞將會(huì)發(fā)生腫脹、脫落，線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)生成空泡并且斷裂破壞。急性破壞期過后是增殖期，此時(shí)，肺泡周圍將聚集大量成纖維細(xì)胞，最終導(dǎo)致肺纖維化的形成。百草枯中毒

2、的臨床表現(xiàn)取決于百草枯的攝入量。大量攝入（>50-100ml，20％濃度）將導(dǎo)致多臟器衰竭；小劑量攝入則主要是在2-6天內(nèi)發(fā)生發(fā)展的肺損傷和腎損傷。其中，肺損傷主要分兩個(gè)階段：第1至3天的急性肺泡炎期，以及此后的肺纖維化期。遺憾的是，對(duì)百草枯中毒，目前尚沒有有效的治療手段。因此，以百草枯的毒理機(jī)制及毒物代謝動(dòng)力學(xué)為突破口，尋找新的合理治療方法迫在眉睫。芹菜素是一種天然來源的黃酮類化合物，在多種蔬果及中藥材中廣泛存在。眾多研究已證實(shí)，芹菜

3、素具有抗氧化、抗炎、抑制腫瘤發(fā)生等作用。一些動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，在LPS引起的急性肺損傷中，芹菜素可以起到保護(hù)作用。然而，以往科研工作者對(duì)芹菜素的研究多集中在腫瘤性疾病、自身免疫病、LPS誘導(dǎo)的炎癥等方面，而其在百草枯中毒方面的作用尚未見報(bào)道。
　　目的：研究芹菜素對(duì)百草枯中毒所致的小鼠急性肺損傷的作用，并對(duì)其可能存在的機(jī)制作初步探討。
　　方法：⑴體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分，將小鼠隨機(jī)分為4組，分別為正常對(duì)照組、PQ組、PQ+API（20 m

4、g/kg體重）組、PQ+API（50 mg/kg體重）組，每組18只，各組小鼠在PQ誘導(dǎo)并經(jīng)芹菜素或賦形劑處理后的第三天處死，收集以下標(biāo)本并進(jìn)行相關(guān)分析：收集支氣管肺泡灌洗液（BALF），以流式細(xì)胞術(shù)（FCM）的方法檢測BALF中炎癥細(xì)胞總數(shù)及其亞群計(jì)數(shù)，ELISA法檢測促炎細(xì)胞因子 TNF-α、IL-6的水平；收集肺組織標(biāo)本，制作HE染色病理切片觀察組織形態(tài)學(xué)改變，生物化學(xué)方法檢測肺組織蛋白含量、MDA水平及SOD、GSH-Px、CA

5、T酶活性；收集脾臟標(biāo)本，檢測重量變化，分離脾細(xì)胞并經(jīng)LPS或ConA刺激24或72小時(shí)后，檢測細(xì)胞因子IL-6、IL-2的水平。⑵體外實(shí)驗(yàn)部分，取正常小鼠脾細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng) LPS及不同濃度芹菜素（0，1，2.5，5，10，20μM）共培養(yǎng)24小時(shí)后收集細(xì)胞和上清，ELISA法檢測細(xì)胞上清的TNF-α、IL-6的水平；FCM檢測抗原提呈細(xì)胞（包括樹突狀細(xì)胞）表面分子CD80、CD86、MHCII的表達(dá)情況；CCK-8試劑盒檢測芹菜素對(duì)脾

6、細(xì)胞的毒性作用。
　　結(jié)果：①芹菜素可減少肺部氧化應(yīng)激產(chǎn)物 MDA的產(chǎn)生（P<0.001），增強(qiáng)抗氧化還原酶SOD（P<0.001）、GSH-Px（P<0.01）及CAT（P<0.01）的活性；②芹菜素可減少肺部的炎癥細(xì)胞浸潤，降低BALF中促炎細(xì)胞因子IL-6（P<0.01）、TNF-α的水平（P<0.01），并減少肺組織蛋白滲出（P<0.01）；③芹菜素可減少脾的重量損失（P<0.05），降低百草枯脾細(xì)胞產(chǎn)生的 IL-6水平（

7、P<0.05），增加IL-2水平（P<0.05）；④芹菜素可直接抑制脾細(xì)胞中促炎細(xì)胞因子 IL-6（P<0.01）及 TNF-α（P<0.05）的產(chǎn)生；抑制抗原提呈細(xì)胞，特別是樹突狀細(xì)胞表面的共刺激分子 CD80、CD86、MHCⅡ的表達(dá)；在一定濃度范圍內(nèi)，芹菜素不影響免疫細(xì)胞活性。
　　結(jié)論：芹菜素可減輕百草枯誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷，該保護(hù)效應(yīng)可能是通過抗炎和抗氧化等機(jī)制實(shí)現(xiàn)的。其中芹菜素可通過抑制抗原提呈細(xì)胞的成熟而產(chǎn)生一定的抗