TGFβ1-Smad通道在百草枯肺損傷中作用機制的實驗研究.pdf

1、背景:百草枯(PQ)，1，1'-二甲基-4，4'-聯(lián)吡啶二氯陽離子鹽，自1962年開始作為除草劑生產(chǎn)使用，近30年已成為發(fā)展中國家應用最廣泛的除草劑之一。隨著百草枯的廣泛應用，口服自殺或誤服百草枯的病例也在逐年不斷增加。大多數(shù)中毒患者是經(jīng)口服，但PQ經(jīng)皮膚接觸或呼吸道吸入也可造成急性中毒，且中毒后死亡率極高。PQ吸收進入血液后幾乎不與血漿蛋白結(jié)合，能迅速分布于肺、肝、腎和肌肉等組織中，但主要蓄積在肺和骨骼肌中，所以中毒后以肺部損傷最為突

2、出，除此之外有學者認為肺部損傷嚴重可能與肺泡Ⅱ型上皮細胞多胺類物質(zhì)攝取途徑有關。中、重度的PQ中毒早期為肺水腫等急性肺損傷表現(xiàn)，晚期出現(xiàn)進行性肺纖維化。PQ誘導肺組織損傷的機制尚未完全清楚，目前研究較多的學說包括氧自由基學說，脂質(zhì)過氧化損傷，細胞因子以及DNA損傷等，但仍沒有一個學說能詳細闡明PQ肺損傷的具體機制。近年來，隨著細胞分子學的發(fā)展，細胞因子網(wǎng)絡在肺纖維化中的作用越來越受到人們的重視，隨之的研究亦越來越多。其中TGF-β1已被

3、公認為是纖維化形成和發(fā)展的啟動因子，它通過介導下游的Smad以及ERK信號通道共同參與了纖維化的形成。目前已有學者證實TGF-β1在PQ中毒大鼠模型及中毒患者的肺纖維化形成中均發(fā)揮重要的作用，而TGF-β1是否也同樣通過Smad信號通道介導了PQ肺纖維化的形成，關于此方面的研究報道甚少。
　　 目的:建立大鼠百草枯中毒急性肺損傷模型，研究TGFβ1-Smad通道在百草枯肺損傷中的作用機制。
　　 方法:成年雄性Wiste

4、r大鼠共80只，隨機分為2組，百草枯染毒組給予體積分數(shù)20％的百草枯原液按照50mg/kg大鼠體重灌胃;正常對照組給予等量生理鹽水灌胃。染毒組和對照組分別于實驗開始第7、14、21、28天分批處死動物，留取肺組織待檢。ELISA方法測定肺組織勻漿中TGF-β1水平;用免疫組化分析分別測定TGF-β1、TBRⅠ（轉(zhuǎn)化生長因子βⅠ型受體）、Smad4、ColⅠ（Ⅰ型膠原）、TIMP1（基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1），MMP2（基質(zhì)金屬蛋白酶-2

5、）在肺組織中的表達;同時留取部分肺組織做病理切片，行HE和Masson染色后光學顯微鏡下觀察肺組織病理改變。
　　 結(jié)果:百草枯染毒組肺組織勻漿中的TGF-β1水平以及肺組織中TGF-β1、TBRⅠ、Smad4、ColⅠ表達在中毒后都呈逐漸增高趨勢，且在中毒第14天達最高值，較同期對照組均升高，差異有統(tǒng)計學意義。各實驗天數(shù)染毒組肺組織中MMP-2及TIMP-1的表達較同期對照組均升高，差異有統(tǒng)計學意義。MMP-2在中毒第7天達最