雌性羔羊脂聯(lián)素受體的表達(dá)定位及限飼對生殖軸相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、脂聯(lián)素作為一種主要由脂肪組織合成的具有多種生物學(xué)功能的特殊蛋白，在增強(qiáng)脂肪酸氧化、抗炎癥反應(yīng)、抗糖尿病等方面起重要作用。脂聯(lián)素通過其受體（AdipoR1和AdipoR2）介導(dǎo)的AMPK、PPAR、p38MAPK等信號通路發(fā)揮生物學(xué)作用。近年來，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素可能是參與營養(yǎng)調(diào)控生殖的關(guān)鍵信號因子。然而，脂聯(lián)素及其受體在綿羊機(jī)體組織中的表達(dá)以及脂聯(lián)素參與羔羊營養(yǎng)調(diào)控生殖的研究還未見報道。本研究以2月齡雌性羔羊?yàn)閷ο?，首先?yīng)用qRT

2、-PCR分析AdipoR1/2在雌性羔羊機(jī)體組織中的表達(dá)，應(yīng)用IHC對羔羊卵巢和子宮組織中AdipoR1蛋白進(jìn)行定位，然后應(yīng)用ELISA分析限飼對綿羊血清脂聯(lián)素以及相關(guān)生殖激素水平的影響，應(yīng)用qRT-PCR分析限飼對綿羊下丘腦-垂體-卵巢軸上AdipoR1/2基因及相關(guān)基因表達(dá)的影響。通過以上研究探討脂聯(lián)素參與綿羊機(jī)體營養(yǎng)調(diào)控生殖的可能機(jī)制。
　　1.AdipoR1/2基因在雌性羔羊機(jī)體組織中的表達(dá)及AdipoR1蛋白在卵巢和子宮

3、中的定位研究
　　為了研究AdipoR1/2基因在雌性羔羊機(jī)體組織中的表達(dá)及定位，選擇6只2月齡雌性杜湖雜交F1代綿羊，放血屠宰后，采集下丘腦、垂體、一側(cè)卵巢和子宮、松果體、視網(wǎng)膜、大腦、小腦、腦橋、嗅腦、乳腺、心臟、肝臟、脾臟、腎臟和骨骼肌共16種組織液氮凍存，另一側(cè)卵巢和子宮樣品置于多聚甲醛固定。應(yīng)用qRT-PCR檢測AdipoR1/2基因的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AdipoR1基因在骨骼肌中表達(dá)量最高，在大腦、小腦、視網(wǎng)膜、心臟中表

4、達(dá)量其次，在其余11種組織中表達(dá)量較低;AdipoR2基因在肝臟中表達(dá)量最高，在心臟、大腦、小腦、視網(wǎng)膜、卵巢中表達(dá)量其次，在其余10種組織中表達(dá)量較低。應(yīng)用IHC研究AdipoR1蛋白在羔羊卵巢和子宮上的定位，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AdipoR1蛋白特異性表達(dá)于各級卵泡的卵母細(xì)胞以及子宮內(nèi)膜的腔上皮和腺上皮細(xì)胞中。這些結(jié)果為研究脂聯(lián)素系統(tǒng)在生殖中的作用提供試驗(yàn)依據(jù)。
　　2.限飼對雌性羔羊下丘腦-垂體-卵巢軸脂聯(lián)素系統(tǒng)及相關(guān)基因表達(dá)的影響<

5、br>　　為了研究限飼對綿羊脂聯(lián)素系統(tǒng)及相關(guān)基因表達(dá)的影響，將18只2月齡雌性杜湖雜交F1代綿羊分為3組:對照組（C:自由采食）、低限飼組(LR:70％自由采食)和高限飼組(HR:50％自由采食)進(jìn)行飼喂。2個月后屠宰，收集血清和下丘腦-垂體-卵巢組織。 ELISA結(jié)果表明:限飼提高了雌性羔羊血清脂聯(lián)素水平，降低了LH、FSH、E2、P4激素水平。qRT-PCR結(jié)果表明，限飼提高了HPO軸上AdipoR1/2基因表達(dá)水平，降低了下丘腦K