小尾寒羊脂聯(lián)素基因的克隆測序、結(jié)構(gòu)特征與表達分析.pdf

1、脂肪對于綿羊維持正常生命活動及生理代謝發(fā)揮重要的作用，脂肪性狀是影響綿羊肌肉品質(zhì)的一個重要的經(jīng)濟性狀。脂聯(lián)素(Adipoq)是脂肪組織分泌的一種內(nèi)源性特異蛋白質(zhì)，也是一種重要的脂肪細胞因子。本試驗克隆了小尾寒羊脂聯(lián)素基因的全長cDNA序列，并對該基因及其所編碼的蛋白、mRNA水平和蛋白水平上的表達豐度進行了分析。主要研究結(jié)果如下:
　　1.采用RT-PCR和RACE方法，以小尾寒羊組織為試驗材料，克隆了小尾寒羊脂聯(lián)素基因的全長cD

2、NA序列，獲得GenBank登錄號為KM216385。該基因cDNA全長為2616 bp，包含720 bp的開放閱讀框、76bp的5'非編碼區(qū)(5'UTR)和1820bp的3'非編碼區(qū)(3'UTR)。其中，開放閱讀框編碼239個氨基酸。
　　2.生物信息學分析顯示，脂聯(lián)素基因編碼的蛋白分子量為26 kDa，等電點為5.88，并存在信號肽結(jié)構(gòu)，能被分泌到細胞外發(fā)揮作用。在氨基酸序列中，發(fā)現(xiàn)2個蘇氨酸、3個絲氨酸和3個酪氨酸殘基存在磷

3、酸化位點，并發(fā)現(xiàn)存在5個O-糖基化位點而無N-糖基化位點。與其他物種的氨基酸同源性分析，證明綿羊脂聯(lián)素蛋白的氨基酸序列與山羊的相似性最高。
　　3.檢測到Adipoq基因在小尾寒羊和杜泊羊中呈現(xiàn)出組織表達差異性。不同組織間，脂聯(lián)素基因在皮下脂肪、腎周脂肪、腹股溝脂肪、臂二頭肌、心血管組織中有表達，在肝臟、腎臟、卵巢組織中未檢測到表達，提示脂聯(lián)素基因的表達有一定的組織特異性。其中，該基因在三種脂肪組織中表達水平最高，極顯著高于其他組

4、織(P＜0.01)，但是三種脂肪組織之間的表達量無顯著差異(P＞0.05)。不同品種間，脂聯(lián)素基因在杜泊羊臂二頭肌組織中的表達極顯著高于小尾寒羊(P＜0.01)。
　　4.檢測到Adipoq蛋白在小尾寒羊和杜泊羊中存在組織表達差異性。不同組織間，脂聯(lián)素蛋白在皮下脂肪、腎周脂肪、腹股溝脂肪、臂二頭肌、心血管組織中有表達，在肝臟、腎臟組織中未檢測到表達。其中，脂聯(lián)素蛋白在三種脂肪組織中表達量最高，極顯著高于臂二頭肌和心血管(P＜0.0

5、1)，但是三種脂肪組織之間的表達量無顯著差異(P＞0.05);不同品種間，脂聯(lián)素蛋白在三種脂肪組織中的表達量，小尾寒羊均高于杜泊羊，但差異均不顯著(P＞0.05)。杜泊羊臂二頭肌的脂聯(lián)素蛋白表達量高于小尾寒羊，而心血管中脂聯(lián)素蛋白表達水平低于小尾寒羊，但是差異也不顯著(P＞0.05)。
　　綜上所述，本研究成功克隆了小尾寒羊脂聯(lián)素基因，對該基因序列及其編碼的氨基酸序列的結(jié)構(gòu)特征進行了預測，并比較分析了小尾寒羊和杜泊羊脂聯(lián)素基因mR