毛竹生長素相關基因的克隆及輻射對其表達的影響.pdf

1、分類 號 : 密 級 :華 中農(nóng)業(yè) 大 學碩 士 學位 論 文毛 竹生 長 素 相 關基 因的克 隆及 輻 射 對 其 表 達 的 影 響M o le c u la rC lo n in go fA u x in 一 r e la te dG e n e sfr o mM o soB a m b o oS e e d lin g sa n dth eE ff e c tso fR a d ia tio nT r e a tm e n t

2、so nG e n eE X P r e SS10 ll研 究 生 : 張 艷指 導 教 師 : 徐 有 明 教 授指 導 小 組 : 徐 有 明 教 授高 健 研 究 員專 業(yè) : 植 物 學獲 得 學位 名 稱 : 理 學 碩 士研 究 方 向: 植 物 分子 生物 學獲 得 學位 時 間 : 2010 年 6 月 26 日華 中農(nóng) 業(yè) 大 學 園藝 林 學 學 院二 O 一 O 年六 月華 中農(nóng)業(yè)大學 2010 屆碩 士學位論文2

3、. 2 . 10 重 組質(zhì) 粒 的酶 切鑒 定及測序 分 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……182. 2 .11 植 物 表 達 載 體 構建 ， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

4、 . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . ……， ， …， ， . ， …， . . . . . . . . . . . . . . ……182. 2.12 根癌 農(nóng) 桿 菌感 受態(tài)細 胞 的制 備 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

5、. . . . . . . . . . . . . . . . ……192. 2.13 重 組 質(zhì) 粒 轉(zhuǎn) 化 根 癌 農(nóng) 桿 菌感 受 態(tài) 細 胞 ( 電擊 法 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……192 . 2 . 14 農(nóng) 桿 菌 菌 液 P C R 鑒 定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

6、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . ……， . ， .202 . 2 . 巧 擬 南 芥 的培 養(yǎng) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

7、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……202 . 2 . 16 農(nóng) 桿 菌 介 導 的擬 南 芥 轉(zhuǎn) 化 . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

8、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……202 . 2 . 17 擬 南 芥 轉(zhuǎn) 化 種 子 的篩選 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

9、. ……212 . 2 . 18 轉(zhuǎn) 基 因擬 南 芥 植 株 基 因組 D N A 的檢 測 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……212 . 2 ， 19 毛 竹 種 子 的輻 射 處 理 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

10、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……222 . 2 . 20 實 時 熒 光 定 量 P C R 樣 品 cD N A 的合 成 . . . . . . . . . . . . . . . ……， . ， . . …， . ……， . ， .

11、. …， . …， . ， . 222. 2 . 21 實 時熒 光 定 量 P C R 進 行 表 達 分 析 . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……233 結果 與 分 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

12、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……253.1Ph eA BP ] 基 因 的克 隆及 表 達 分析 . . . . …

13、… ， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . ， 二 ， . …， . …， . ， 二 ，. . . . ……253.1.1P heA B P 了基 因 片 段 的克 隆 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

14、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……253.1. 2Ph eA BP I 全 長 基 因 的克 隆 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

15、. . . . . . ……263.1. 3 尸 heA B P I 基 因 的序 列 分 析 . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……263. 1. 4 毛 竹 生 長 素 結 合 蛋 白基 因 尸 h

16、eA BP I 編 碼 蛋 白結 構 特 征 分 析 . . . . . . . . . . . . . . . ……283. 1. 5 尸 heA BP I 基 因植 物 表 達 載 體 構 建 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

17、 ……303. 1. 6 P heA BP 了基 因轉(zhuǎn) 化 擬 南 芥 及 抗 性 篩 選 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……313. 2 尸 heA R FI 基 因 的克 隆及 表 達 分析 . . . . . . . . . . . . . . . .

18、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……313. 2 . 1Ph eA R F I 基 因 片 段 的 克 隆 . …， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

19、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……313. 2 . 2 尸 heA R 盧 ’ 1全 長 基 因 的克 隆 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， ， . . …， . . . . ……， ……， 二 ， . . . . . . . ……， .323. 2

20、. 3Ph eA R Fj 基 因 的序 列 分 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……323. 3 毛 竹種 子 的輻 射 處 理情 況 . . . . . . . . . .

21、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . ……333. 3. 1 毛 竹 總 R N A 的提 取 與 反轉(zhuǎn) 錄 . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . .

22、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……343. 3. 2 實 時熒 光 定量 P C R 擴 增 曲線和 溶 解 曲線分 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……353. 4 基 因表 達 情 況

23、分 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . .. . . . . . . . ……383. 4 . 1 尸 heA B P I 基 因 的 表 達 情 況 . . .

24、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . ……383 . 4 . 2 尸 heA R FI 基 因 的表 達 情 況 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

25、. . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……424 討 論 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

26、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……4 64 . 1P heA B P I 基 因 的 討 論 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

27、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . ……4 64 . 2P heA R FI 基 因 的 討 論 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . .