藏系綿羊三種促毛生長因子基因的克隆及營養(yǎng)差異對其mRNA表達的影響.pdf

1、藏系綿羊又稱為藏羊，是我國三大原始綿羊品種之一，主要分布在高寒牧區(qū)，青海是主要產(chǎn)區(qū)。藏系綿羊被毛纖維粗長，毛質(zhì)細膩且保暖性好，是制造床毯、地毯等的良好原料。羊毛的生長本身就是各種生長因子或激素相互作用，共同促進毛囊生長的結(jié)果，本研究以IGF-Ⅰ、VEGF和HGF三種基因為研究對象，從自然放牧的藏系綿羊所產(chǎn)1月齡羔羊皮膚樣本中提取了總Mrna，依據(jù)GenBank中普通綿羊的基因序列，設(shè)計特異性引物，分別擴增了表達IGF-Ⅰ、VEGF和HG

2、F三種生長因子的功能基因，并對所擴增出的基因進行了克隆和序列分析；另外，還采用實時熒光定量PCR技術(shù)SYBR Green I熒光染料法，對妊娠后期藏系綿羊進行營養(yǎng)補飼后，就其所產(chǎn)羔羊體內(nèi)的IGF-I、VEGF和HGF基因Mrna的表達水平進行了相對定量分析。
　　 本研究取得了如下結(jié)果：
　　 1.成功克隆出了藏系綿羊VEGF基因全長CDS共573bp、IGF－ⅠCdna序列共940bp和HGF基因Cdna的部分序列，長

3、度為108bp。經(jīng)序列比對后發(fā)現(xiàn)，所研究的這三個基因與普通綿羊、山羊、牛、馬、豬、人、雞、鴨、大鼠和小鼠等物種之間具有高度同源性，其相似性在100％至74.2％之間，其中藏系綿羊與普通綿羊的這三個基因的同源性最高，相似性為100％。
　　 2.建立了快速檢測IGF-I、VEGF和HGF基因表達量的方法，通過該方法的檢測結(jié)果表明：給妊娠后期藏系母羊補飼營養(yǎng)舔磚后，所產(chǎn)羔羊體內(nèi)IGF-Ⅰ、VEGF和HGF基因的表達水平均比對照組高，