GPC3mAB-SiO2-DOX載藥納米粒對荷肝癌裸鼠模型的治療效應(yīng).pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)主要探討應(yīng)用GPC3單抗介導(dǎo)阿霉素二氧化硅載藥納米(GPC3mAb-SiO2-DOX)對HepG2細(xì)胞誘導(dǎo)的荷肝癌裸鼠模型的腫瘤治療效果以及該載藥納米粒是否減少對其他正常器官，如心臟、腎臟等的毒副作用。
　　方法：
　　1、制備GPC3mAb-SiO2-DOX:利用碳二亞胺(EDC)作為中間連接體，使SiO2-DOX和GPC3mAb進(jìn)行偶聯(lián)，即獲得GPC3mAb-SiO2-DOX靶向藥物;利用圓二色譜

2、儀對偶聯(lián)前后的GPC3mAb進(jìn)行表征，并使用全波長酶標(biāo)儀法計(jì)算靶向藥物的載藥率及包封率。
　　2、建立HepG2肝癌細(xì)胞皮下移植瘤模型，當(dāng)達(dá)到成瘤標(biāo)準(zhǔn)(200mm3)后隨機(jī)分為NS組、DOX組、GPC3mAb組、SiO2-DOX組、GPC3mAb-SiO2-DOX組;治療期間，每隔一天記錄各組小鼠的體重、腫瘤體積及精神狀態(tài)，比較各組藥物的腫瘤治療效果。
　　3、第13天后，處死裸鼠取眼球血，檢測AFP、肝腎功、心肌酶譜指標(biāo)，

3、分離腫瘤、肝臟、腎臟、心臟組織。肉眼觀察腫瘤外觀，對腫瘤組織進(jìn)行免疫組化，觀察AFP及GPC3蛋白的表達(dá)。觀察腫瘤、肝臟組織病理切片，比較各組藥物的腫瘤治療效果。觀察心臟、腎臟組織病理切片，明確該靶向藥物是否對其他正常器官，如心臟、腎臟產(chǎn)生較小的毒副作用。
　　結(jié)果：
　　1、載藥納米粒GPC3mAb-SiO2-DOX的包封率及載藥量分別為42.19％和21.9％。通過圓二色譜儀進(jìn)行表征，發(fā)現(xiàn)GPC3mAb偶聯(lián)前后變化較弱，

4、表明GPC3mAb交聯(lián)到SiO2-DOX中，其自身結(jié)構(gòu)變化小，不影響其抗體活性。
　　2、成功建立荷肝癌裸鼠模型:檢測血清中AFP濃度為67.38±8.96 ng/ml，接近正常上限10倍左右;免疫組化鏡檢顯示:GPC3和AFP在腫瘤組織中均被染為棕黃色，呈陽性表達(dá)。
　　3、載藥納米粒的治療效果:荷瘤鼠皮下腫瘤達(dá)到成瘤標(biāo)準(zhǔn)(200mm3)之前，各組裸鼠體重增加情況相近(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，GPC3mAb-SiO2-

5、DOX組體重小于NS組、GPC3mAb組，差異顯著(P＜0.05)，GPC3mAb-SiO2-DOX組體重與SiO2-DOX組、DOX組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，NS組腫瘤體積明顯增長，與其他各治療組比較，差異顯著(P＜0.05)，GPC3mAb-SiO2-DOX組的腫瘤體積小于與DOX組，差異顯著(P＜0.05)，而GPC3mAb-SiO2-DOX組與SiO2-DOX組腫瘤體積相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。通過

6、觀察各組腫瘤組織病理切片，發(fā)現(xiàn)NS組有大量的腫瘤細(xì)胞存在，細(xì)胞密集，核大深染，分化程度低，細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，惡性程度高;而載藥納米粒組腫瘤組織壞死組織面積大，有可辨別邊界，分化程度較好，表明載藥納米粒對皮下移植瘤具有一定的治療作用;通過觀察肝臟組織病理切片，發(fā)現(xiàn)NS組有可疑癌細(xì)胞浸潤，而DOX組、SiO2-DOX組和GPC3mAb-SiO2-DOX組均有不同程度炎癥細(xì)胞浸潤，分析這三組在治療腫瘤的同時(shí)對肝臟也有不同程度損傷，而GPC3mA

7、b組肝臟組織正常，分析其對皮下腫瘤有一定的治療作用，作為一種生物制劑并不導(dǎo)致組織損傷。
　　4、毒副作用研究:觀察病理切片顯示，與對照組相比載藥納米粒組的心臟、腎臟組織均沒有明顯的組織學(xué)異常，血清學(xué)檢測腎功、心肌酶譜也發(fā)現(xiàn)載藥納米粒毒副作用較小;證明DOX通過靶向納米粒負(fù)載后，可降低化療藥物DOX的心臟、腎臟毒性，這可能與載藥納米粒中GPC3mAb特異性靶向至腫瘤有關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1、與對照組相比，靶向載藥納米粒