不同液體對脂多糖刺激下A549細胞產(chǎn)生凝血-纖溶因子的影響.pdf

1、目的:
　　觀察不同劑量的生理鹽水、羥乙基淀粉130/0.4氯化鈉溶液及乳酸鈉林格溶液培養(yǎng)對脂多糖（LPS）刺激后的人Ⅱ型肺泡上皮細胞A549產(chǎn)生凝血及纖溶相關(guān)因子的影響。
　　方法:
　　將處于對數(shù)生長期的A549細胞按隨機數(shù)字表法分為空白對照組、LPS損傷組、生理鹽水（NS）組、羥乙基淀粉130/0.4氯化鈉（萬汶）組及林格液組，NS組、萬汶組及林格液組按加入的量不同再分為20％及40%體積比組；除空白對照組僅加普

2、通培養(yǎng)液外，其余各組均加入LPS致其終濃度為75ug/ml，培養(yǎng)液總體積為2ml；培養(yǎng)12h后，分別采用免疫組化方法檢測細胞中TF、sEPCR、PAI-1及t-PA蛋白的表達情況；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）及實時熒光定量PCR（Real-time PCR）檢測細胞中組織因子（TF）、可溶性內(nèi)皮細胞蛋白C受體（sEPCR）、纖溶酶原激活物抑制因子（PAI-1）、人組織型纖溶酶原激活物（t-PA）的蛋白量及相應(yīng)mRNA表達水平，并計

3、算PAI-1/t-PA蛋白及PAI-1/t-PA mRNA比值。
　　結(jié)果:
　　免疫組化結(jié)果顯示TF、sEPCR、PAI-1及t-PA蛋白主要表達在細胞漿中。LPS組細胞內(nèi)TF、sEPCR、PAI-1及t-PA蛋白表達較空白對照組明顯增強；與空白對照組比較，LPS損傷組TF、sEPCR、PAI-1、t-PA蛋白量均明顯增高[TF（pg/ml）：22.21±0.25比13.51±0.31，sEPCR（pg/ml）:22.17

4、±0.06比8.50±0.12, PAI-1（pg/ml）：28.80±1.44比5.42±1.17，t-PA（pg/ml）：12.87±0.12比6.03±0.08，均P＜0.01]，PAI-1/t-PA蛋白比值（2.24?0.09比0.90?0.20，P<0.01）也明顯增高。LPS損傷組相應(yīng)的TF、sEPCR、PAI-1及t-PA的mRNA表達也明顯高于空白對照組（以空白對照組為1，TF、sEPCR、t-PA、PAI-1的相對表達

5、量分別為4.191±0.055、1.540±0.052、2.156±0.066、2.398±0.077，均P＜0.01）；與LPS損傷組比較，20%、40%NS組TF、sEPCR、PAI-1、t-PA蛋白均較LPS損傷組明顯降低（均P<0.01），而40% NS組降低更為明顯，但仍高于空白對照組（均P＜0.01），40%NS組PAI-1/t-PA蛋白比值較LPS組明顯降低（P＜0.01）。20%、40%NS組TF和sEPCR的mRNA表

6、達及40%NS組PAI-1和t-PA mRNA表達均較LPS損傷組明顯降低（均P<0.01）,且仍以40%的生理鹽水組降低較為明顯。20%林格組TF、sEPCR較LPS損傷組下降（均P<0.05），40%林格組TF、sEPCR卻高于LPS損傷組（均P<0.01），兩組PAI-1及PAI-1/t-PA蛋白比均高于LPS損傷組（均P<0.01），以40%林格組升高明顯；20%、40%林格組sEPCR mRNA均較LPS損傷組明顯升高（均P<

7、0.01），20%林格組PAI-1 mRNA較LPS損傷組降低（均P<0.01），而40%林格組PAI-1 mRNA高于LPS損傷組（均P<0.01）；20%萬汶組sEPCR蛋白較LPS損傷組降低（P<0.01），40%萬汶組TF及sEPCR蛋白均較LPS損傷組升高（均P<0.01）；20%、40%萬汶組PAI-1、PAI-1/t-PA蛋白比均高于LPS損傷組（均P<0.01），以40%萬汶組升高更為顯著；20%、40%萬汶組sEPCR

8、 mRNA及40%萬汶組TF mRNA、PAI-1/t-PA mRNA比值均較LPS損傷組上升（均P<0.05）。20%林格組及20%萬汶組TF、TF mRNA、sEPCR mRNA、PAI-1、PAI-1/t-PA蛋白比均高于20%NS組（均P<0.01）；20%萬汶組PAI-1、TF mRNA、sEPCR mRNA高于20%林格組（均P<0.01）；40%林格組及40%萬汶組TF、TF mRNA、sEPCR、sEPCR mRNA、P

9、AI-1、PAI-1 mRNA、PAI-1/tPA蛋白比均高于40%NS組（均P<0.01），40%萬汶組TF、TF mRNA、PAI-1、PAI-1 mRNA、PAI-1/t-PA蛋白比高于40%林格組（均P<0.01）。
　　結(jié)論:
　　A549細胞在LPS刺激下，細胞內(nèi)TF、sEPCR、PAI-1和t-PA的合成和分泌均明顯增加。生理鹽水可抑制LPS刺激后A549細胞TF、sEPCR及PAI-1的合成，且其抑制作用隨著