全氟化碳對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的A549細(xì)胞ICAM-1表達(dá)的影響及其作用機(jī)制的初步探討.pdf

1、目的:ALI/ARDS以進(jìn)行性呼吸困難和頑固性低氧血癥為主要特征,且病情兇險(xiǎn),死亡率高,是臨床常見的危重癥,目前尚無(wú)特效的治療方法。研究顯示應(yīng)用全氟化碳的液體通氣對(duì)ALI/ARDS的治療效果優(yōu)于常規(guī)機(jī)械通氣,且全氟化碳能拮抗ALI/ARDS導(dǎo)致的炎癥反應(yīng),但其抗炎的機(jī)制仍不明確。本研究擬從miRNA的角度探討全氟化碳的抗炎機(jī)制。
　　方法:(1)用PFC干預(yù)LPS誘導(dǎo)的A549急性肺損傷細(xì)胞模型,細(xì)胞分為空白對(duì)照組(C),LPS刺

2、激組(LPS),LPS+PFC干預(yù)組(L+P),PFC干預(yù)組(PFC)四組,應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR和western blot檢測(cè)各組細(xì)胞ICAM-1mRNA水平和蛋白水平的變化。(2)應(yīng)用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)可能受PFC調(diào)控的miRNA,并用熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)進(jìn)行篩選。(3)將篩選出的miRNA-17-3p抑制物和模擬物分別轉(zhuǎn)染A549,觀察對(duì)PFC抗炎作用的影響。(4)雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)驗(yàn)證miRNA-17-3p與ICAM-1的

3、標(biāo)靶關(guān)系。
　　結(jié)果:(1)PFC能明顯抑制LPS誘導(dǎo)的A549細(xì)胞ICAM-1基因mRNA和蛋白的表達(dá),而對(duì)未經(jīng)誘導(dǎo)的細(xì)胞則無(wú)顯著影響。(2)在對(duì)預(yù)測(cè)出的11個(gè)miRNA進(jìn)行驗(yàn)證后發(fā)現(xiàn)miRNA-17-3p可能受PFC調(diào)控。(3)A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-17-3p的模擬物能增強(qiáng)PFC的抗炎作用,轉(zhuǎn)染miR-17-3p的抑制物則能在PFC干預(yù)的初期減弱其抗炎作用。(4)miRNA-17-3p能靶向調(diào)控ICAM-1的表達(dá)。