全氟化碳對(duì)脂多糖致肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞鈉離子通道功能受損的保護(hù)作用.pdf

1、目的:
　　本研究旨在探討全氟化碳對(duì)脂多糖致肺泡II型上皮細(xì)胞鈉離子通道(ENaC)功能受損的保護(hù)作用。
　　方法:
　　(1)應(yīng)用LPS(10μg/ml)干預(yù)A549細(xì)胞0-6h,采用qPCR檢測(cè)1L-1β、IL-6、TNF-α和ENaC-α的mRNA表達(dá),采用western-blot檢測(cè)ENaC-α蛋白表達(dá);建立肺損傷細(xì)胞模型;
　　(2)實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、LPS組、PFC組和 LPS/PFC組;
　　(

2、3)分組干預(yù)4h和6h后分別提取胞漿和胞膜蛋白,行western-blot檢測(cè)ENaC-α蛋白的表達(dá);
　　(4)分組干預(yù)4h,應(yīng)用膜片鉗全細(xì)胞記錄模式檢測(cè)跨膜電流變化后,標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞外液中加入ENaC抑制劑阿米洛利(10-5M)后再次檢測(cè),計(jì)算加入阿米洛利鈉前后跨膜電流的變化及在各組間的差異;
　　(5)將A549細(xì)胞接種至snapwell小室,培養(yǎng)至完全融合形成單層上皮,按前述給予分組干預(yù)4h,應(yīng)用尤斯灌流室系統(tǒng)檢測(cè)跨上皮短

3、路電流的變化后,單層上皮頂端側(cè) K-H溶液中加入阿米洛利后再次檢測(cè),計(jì)算加入阿米洛利前后短路電流的變化及在各組的差異。
　　結(jié)果:
　　(1)LPS增加A549細(xì)胞1L-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表達(dá),4h達(dá)到最高峰,6h呈下降趨勢(shì),但仍高于對(duì)照組,LPS抑制ENaC的mRNA和蛋白表達(dá),于4h達(dá)峰值,6h呈上升趨勢(shì),但仍低于對(duì)照組;
　　(2)干預(yù)后4h和6h,LPS抑制了胞膜ENaC-α蛋白的表達(dá),PFC

4、可改善LPS導(dǎo)致的胞膜ENaC-α蛋白表達(dá)下調(diào);但無(wú)論4h還是6h,LPS和PFC對(duì)胞漿ENaC-α蛋白表達(dá)無(wú)明顯影響;
　　(3)干預(yù)4h后,LPS可顯著抑制經(jīng)ENaC通道的鈉離子跨膜鈉離子電流,而 PFC可改善LPS對(duì)跨膜鈉離子電流的抑制;
　　(4)干預(yù)4h后,LPS可顯著抑制A549融合單層上皮的阿米洛利敏感Isc,而PFC可改善LPS對(duì)阿米洛利敏感Isc的抑制;
　　結(jié)論:
　　LPS通過(guò)抑制肺泡II型